Phb-2在無綠藻病發病機制及宿主固有免疫中的作用研究

《Phb-2在無綠藻病發病機制及宿主固有免疫中的作用研究》是依託復旦大學，由章強強擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：Phb-2在無綠藻病發病機制及宿主固有免疫中的作用研究
• 依託單位：復旦大學
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：章強強

項目摘要

無綠藻是一種條件致病真菌，其引起皮膚及系統感染的報導逐年增多，死亡率高，對免疫受累人群危害尤大，已引起國內外較多關注。目前尚無對其致病機制研究的報導。本課題組前期對無綠藻分子生物學鑑定、毒力鑑定及感染動物模型進行了較系統的研究，發現不同菌株致病性存在差異。通過蛋白質組學iTRAQ技術檢測到prohibitin-2(phb-2)含量在致病性菌株中較非致病性菌株顯著升高，並進一步通過蛋白質印跡試驗檢測發現，氧化應激無綠藻細胞中phb-2表達增加並向線粒體移位，因此phb-2可能是與無綠藻致病性相關的重要毒力因子。本課題擬比較phb-2編碼基因缺失前後菌株的生長情況差別；構建小鼠無綠藻感染模型，研究phb-2缺失前後菌株致病力的差異；檢測巨噬細胞對phb-2缺失前後菌株的吞噬殺傷作用差異，探索phb-2對宿主固有免疫的影響。通過以上研究了解無綠藻的致病機制，為研究抗真菌藥物新靶點提供理論基礎。

結題摘要

無綠藻是一種罕見的條件致病真菌，可引起人與動物的感染，臨床診斷比較困難，目前主要依靠微生物實驗室進行診斷和鑑定。無綠藻導致的深部感染在我國極為罕見，迄今我國大陸地區雖有7例皮膚型無綠藻病的報導，但尚無系統性無綠藻病的報導。 課題組首次繪製出了人類感染的中型無綠藻致病株的基因組精細圖，通過蛋白質組學和轉錄組學發現了部分中型無綠藻致病株與環境株間的差異基因，這些基因差異可能通過提高中型無綠藻致病株在缺乏葡萄糖環境中的生存能力，以及對巨噬細胞產生的抗性造成致病性，研究鑑定得到的差異表達基因為研究無綠藻潛在毒力因子提供了理論基礎。同時建立並最佳化了無綠藻的基因敲除方式，通過RNAi對目標基因進行篩選，我們已成功構建數個上述基因表達下調的無綠藻致病株。這些結果初步探索了中型無綠藻致病株可能的致病機制，並為今後的研究奠定了基礎。我們還通過無綠藻致病菌株與非致病的環境菌株與巨噬細胞體外共培養模型的構建，發現不同的菌株吞噬感染巨噬細胞一定時間後存活率存在差異，iNOS mRNA表達和蛋白表達水平存在也有顯著差異，可以部分解釋造成菌株間致病性的不同，以及解釋無綠藻感染的方式，為後續對無綠藻致病方式更深入的探索研究提供了思路。