PTEN在坐骨神經再生中的作用研究

《PTEN在坐骨神經再生中的作用研究》是依託同濟大學，由宋寧寧擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：PTEN在坐骨神經再生中的作用研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：宋寧寧
• 依託單位：同濟大學

中文摘要

近年來的研究發現，磷酸酶PTEN/mTOR信號通路與視神經和皮質脊髓束損傷後的神經再生密切相關，但其是否在更常見的坐骨神經損傷再生中的作用尚未見報導。我們前期的預實驗結果顯示PTEN高表達在背根神經節（DRG）中。鑒於PTEN在胚胎時期的神經元發育中具有重要作用，為研究其在坐骨神經損傷後再生中的作用，我們計畫避開發育階段，在成年時期選擇性敲除DRG神經元中PTEN。本課題擬利用Prrxl1-CreERT2;PTENflox/flox小鼠為模型，在該小鼠DRG中CreERT2有高表達，通過成年後給予他莫昔芬誘導，將PTEN在成年小鼠DRG中特異性敲除。通過形態學、生化分析、行為學和離體分析等手段，以期闡明PTEN/mTOR信號通路在坐骨神經再生中的作用並分析可能的分子機制。這項研究不僅能夠拓寬我們對PTEN基因功能的認識，而且可能為開發新的促進周圍神經再生的藥物提供可參考的研究靶點。

結題摘要

周圍神經損傷在基礎和臨床研究領域都是一個值得深入研究的科學問題。現在已知有相當多的因素能夠影響周圍神經的再生，但對細胞內回響神經損傷以激活神經再生程式的信號機制還了解很少。磷酸酶PTEN (phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10)被證明在視覺神經系統神經發生及其神經損傷與再生、某些精神類疾病、藥物成癮等密切相關，但並不清楚其是否在周圍神經損傷再生中也同樣發揮重要作用。我們利用了在成年時敲除PTEN基因的小鼠模型，以此研究PTEN在坐骨神經損傷後再生中的作用。 整個研究大致分為四個部分： 1.觀察正常小鼠在周圍神經損傷前後，被根神經節PTEN的表達變化。已證明在正常小鼠中，PTEN在背跟神經節中表達，而進行坐骨神經擠壓損傷後，PTEN的表達有所下調。 2.取得成年時敲除PTEN基因的小鼠模型，進行後續研究。我們已將Prrxl1-CreERT2小鼠與PTENflox/flox小鼠進行交配，篩選以得到Prrxl1-CreERT2;PTENflox/flox雙陽性子代小鼠。在成年給予他莫昔芬誘導後，通過PTEN組化驗證，在PTEN條件性基因敲除小鼠中，PTEN在背根神經節的表達明顯下調。並且通過組化雙標實驗，我們證明其在某些特定細胞中表達下調。 3.分析Prrxl1-CreERT2;PTENflox/flox小鼠在坐骨神經擠壓損傷後的行為學表現。通過對對照小鼠以及PTEN條件性敲除小鼠坐骨神經擠壓損傷，對術後不同時間點進行行為學檢測，發現PPTEN條件性敲除小鼠行為恢復指標比對照小鼠有明顯提高。 4.分析Prrxl1-CreERT2;PTENflox/flox小鼠在坐骨神經擠壓損傷後外周神經的恢復情況。由於PTEN並非在所有背跟神經元中表達，而CreER的表達也僅局限於部分背跟神經節神經元。我們原計畫通過將對照小鼠和PTEN小鼠與Rosa26-YFP小鼠交配將CreER表達的細胞標記上黃色螢光，從而觀察外周神經恢復情況，但YFP螢光較弱，現將其與Ai9(Rosa26-DsRed)小鼠交配，將外周神經標記上紅色螢光觀察外周神經恢復情況，目前小鼠已得到，實驗尚在進行中。