《PIMT對類風濕性關節炎滑膜成纖維樣細胞增殖/凋亡的調控》是依託同濟大學，由張慧擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：PIMT對類風濕性關節炎滑膜成纖維樣細胞增殖/凋亡的調控
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：張慧
- 依託單位：同濟大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
新近研究已證實關節滑膜成纖維樣細胞（FLS）的增殖與凋亡失調是類風濕性關節炎（RA）滑膜炎性增生，關節破壞的關鍵原因之一。我們前期研究發現蛋白異天冬氨醯甲基轉移酶（PIMT）在RA-FLS中表達下降，PIMT具有識別並修復蛋白質中異常的L-天冬醯胺殘基作用，而PIMT基因缺失會使這種修復作用喪失從而引起細胞增殖和抵禦凋亡，但PIMT在RA-FLS中表達下降與RA-FLS增殖/凋亡失調之間的具體機制仍然未知。本研究將在前期研究基礎上，利用特異性PIMT-SiRNA和PIMT表達載體，分別作用於原代培養的RA-FLS細胞和RA模型小鼠，通過檢測L-isoAsp,MEK1/2,ERK,Raf,JUK,Bcl-2,Bcl-xL,Bax,Bak,Bim等增殖凋亡相關蛋白和細胞因子，在細胞和動物水平上確定PIMT對RA-FLS增殖/凋亡的具體影響及調控機制，為研究RA的發病機制提供實驗依據。
結題摘要
前期研究發現蛋白異天冬氨醯甲基轉移酶（protein isoaspartyl- methyltransferase, PIMT）在類風濕性關節炎（rheumatoid arthritis, RA）滑膜成纖維樣細胞（fibroblast-like synoviocytes，FLS）中表達顯著下降，而PIMT是一個與細胞增殖、凋亡相關的甲基轉移酶。本項目以原代培養的人和大鼠RA-FLS細胞為研究對象，探討PIMT對於RA-FLS細胞增值凋亡的影響，主要完成了以下研究內容： 1.確定了RA患者體內PIMT表達水平降低：與正常體檢者比較，PIMT mRNA在RA患者的外周血單個核細胞內的表達明顯降低（p＜0.01）；對RA和OA患者關節滑膜組織的免疫組化結果顯示PIMT在RA患者關節滑膜組織中表達降低； 2.確認了PIMT通過Bax/Bcl-2通路調控RA-FLS凋亡:特異性SiRNA降低PIMT的表達，RA-FLS增值增加，凋亡減少；在RA-FLS中過表達PIMT，導致RA-FLS凋亡降低；檢測凋亡相關蛋白，發現PIMT是通過Bax/Bcl-2凋亡通路調控RA-FLS的凋亡； 3.確認了PIMT通過MAPK信號通路調控RA-FLS細胞的增值：在RA-FLS中過表達PIMT質粒，測定MAPK信號通路中相關蛋白，發現PIMT通過MAPK信號通路調控RA-FLS細胞的增值； 4.確認了PIMT對RA-FLS細胞中細胞因子的影響：過表達PIMT後，RA-FLS細胞中IL-1b，IL-6，IL-8，IL-17，TNF-α和VEGF表達下降，IL-10表達增高；特異性SiRNA下調PIMT的表達後，RA-FLS細胞中的IL-10表達降低； 6.在II型膠原誘導的大鼠RA模型的RAT-FLS中驗證了PIMT能通過Bax/Bcl-2凋亡通路調控RAT-FLS的凋亡和通過MAPK信號通路調控RA-FLS細胞的增值。 本項目在細胞水平和動物水平上確定了PIMT對於RA-FLS細胞增殖凋亡的調控機制，為闡明RA 發病機制和尋找治療靶點提供實驗依據。
