PH450酶的大量製備方法 CN105112378APH450由瑞士納沙泰爾湖水晶藍藻中提取的皮膚細胞CYP溶解代謝酶組，它能迅速溶解和代謝皮膚各層次各種色素及毒素，打通皮膚排毒通道的代謝成果與大量製備方法提取技術。PH450酶的大量製備方法。無斑時代國際生物科技(深圳)有限公司向國家智慧財產權管理局申請的專利，由1978年諾貝爾生理學醫學獎者沃納·阿爾伯發明。
基本介紹
- 中文名：PH450酶的大量製備方法
- 外文名：Mass preparation of PH450 enzyme methods
- 簡稱：PH450
- 專利號：CN105112378APH450
技術領域,研究背景,技術背景,發明內容,
技術領域
本發明屬於蛋白質提取技術領域，具體涉及一種PH450酶的大量製備方法。
研究背景
沃納 · 阿爾伯（Arber,Werner）聯合多國細胞醫學領域科學家，在瑞士保羅謝勒國家研究所成立“瑞士PH450國際聯合課題組“成為全球皮膚細胞CYP酶技術領域臨床套用的頂級科學平台。
技術背景
PH450色素代謝酶系，或者又稱CYPH450酶、PH450酶，是一類主要存在於肝臟、腸道中的單加氧酶，多位於細胞內質網上，催化多種內、外源物質的（包括大多數臨床藥物）代謝，因為分光光度法測得的吸收峰在450nm附近，故名。其主要分布在SER（內質網膜）中，但也存在於質膜、線粒體、高爾基體、過氧化物酶體、核膜等細胞器的膜中，具有解毒作用，通常可將脂溶性有毒物質，代謝為水溶性物質，使有毒物質排出體外。由於其作為一種末端加氧酶，參與了生物體內的解毒、甾醇類激素合成等過程，還是藥物代謝過程中的關鍵酶，而且對細胞因子和體溫調節都有重要影響；並且，其色素代謝功能可以迅速溶解和代謝皮膚各層次各種色數及毒素，打通皮膚排毒通道；所以在藥物輔助吸收和面部色素清除等產品中均有廣泛的套用。
目前，由於本身PH450酶發現是大量存在於人的肝臟中，雖然後續也發現了細菌、真菌及動植物中有其存在，比較難以自然地通過除雜並分離大量製備得到；為了滿足大量套用的要求，大量進行PH450酶製備的過程一般是通過構建PH450酶基因工程菌的方式在體外進行大量表達獲得。但是這一方式進行製備的過程中，由於表達的基因工程菌是根據基因序列表達獲得PH450酶蛋白產物，由於不存在體內代謝過程中的表達後的功能修飾步驟，所以這一種方式製備得到的PH450酶的活性和品質大大降低，遠無法達到高品質套用的要求。
發明內容
本發明實施的目的在於克服現有的缺陷，提供一種從藍藻中進行具有完整生物活性PH450酶的大量製備方法。
為了實現上述發明目的，本發明實施例的技術方案如下：
一種PH450酶的大量製備方法，包括如下步驟：
獲取藍藻並進行大量培養，並在培養過程中用PH450酶誘導劑進行誘導；
在所述大量培養結束後收集藍藻細胞，提取藍藻細胞總蛋白；
用人PH450酶作為抗原進行免疫反應，製備多克隆抗體；
以所述多克隆抗體作為親和介質製備親和層析柱；
將所述提取的藍藻細胞總蛋白於所述親和層析柱進行過柱。
本發明上述PH450酶的大量製備方法，基於藍藻和人PH450酶在蛋白質的三維結構、活性功能幾乎完全相同，且藍藻代謝簡單、易於誘導和分離的情形，將藍藻誘導培養產物用PH450酶的特異性抗體進行親和層析；相比現有的基因工程菌發酵製備的方法，本發明大量製備的PH450酶是在經過細胞內功能最佳化的活性酶，而且純化分離過程簡單，方法的效益更高。
