PH值增值法，也叫△pH法。此方法是根據酶反應前後pH值的改變來研究酶活性的一種常用方法，本法在美國、日本等國家常用。pH增值法由於測定結果的準確度和精確度都不高，因此，不具有仲裁性。其他的研究方法還有滴定法等。
基本介紹
- 中文名：PH值增值法
- 外文名：PH increment method
- 別稱：△pH法
- 常用國家：美國、日本等國家常用
- 目的：研究酶活性
- 缺點：結果的準確度和精確度都不高
滴定法和pH增值法,脲酶活性的定量測定—pH增值法,
滴定法和pH增值法
滴定法是國家標準方法(標準編號GB/T1356787—1997)，具有仲裁性。但是由於滴定法要求精度高，所用試劑品種較多，且配製複雜，測定過程中操作時間較長，操作步驟較嚴格，給檢測人員的批次測定帶來不便，難以迅速地指導生產。所以在實際生產中，一般多用pH增值法測定酶活性。pH增值法由於測定結果的準確度和精確度都不高，因此，不具有仲裁性。
雖然用滴定法和pH增值法測得的酶活性的數據有較大差別，不能直接通用，但是可以根據它們之間的聯繫，建立一定條件，找到一種簡便易行的方法進行數值間的相互代換，從而實現實驗過程的以簡代繁，以達到迅速、高效地指導實際生產的目的。
脲酶活性的定量測定—pH增值法
1、測定原理
大豆餅粕與中性尿素緩衝液混合，在30℃恆溫條件下，脲酶催化尿素水解產生氨使溶液pH值升高。試樣反應30min後，與空白溶液的pH值之差可間接表示氨量的多少，從而反映脲酶活性的高低。
2、試劑與溶液
①磷酸緩衝液：0.05mol/L。稱取3.403g磷酸二氫鉀(KH2PO4)，溶於100ml水中。再稱取4.355g磷酸氫二鉀(K2HPO4)溶於100ml水中，合併上述2種溶液並稀釋至1 000ml。使用前套用酸溶液或鹼溶液調節pH值為7.0。緩衝液保存期90d。
②尿素緩衝液：稱取15g尿素，溶於500ml磷酸緩衝液中，調節溶液pH值為7.0。為防止細菌滋生，可加入5ml甲苯。
3、儀器設備
①酸度計：具有玻璃電極、甘汞電極；精度0.02pH值。
②恆溫水浴：可控制溫度(30±0.5)℃。
③具塞刻度試管：直徑18mm，長150mm。
④粉碎機：粉碎時應不生強熱(如球磨機)。
⑤樣品篩：孔徑400μm。
⑥分析天平：感量0.0001g。
4、測定步驟
①準確稱取(0.200±0.001)g樣品於試管(A管)中，加入20ml中性尿素緩衝液，立即加塞混勻，30℃恆溫水浴中準確保持30min。在混合操作時切勿倒置試管。
②空白試驗須準確稱取(0.200±0.001)g樣品於試管(B管)中，加入20ml磷酸緩衝液，立即加塞混勻，30℃恆溫水浴中準確保持30min。在混合操作時切勿倒置試管。
上述試驗的製備和空白試驗的製備須相隔5min，水浴期間每5min搖勻試管內容物一次。
③30min後，依次從水浴中取出試管，將上層液體移入小燒杯中，在水浴中取出剛達5min時，分別測定溶液的pH值。
5、結果計算
試驗溶液pH值與空白溶液pH值之差即為尿素酶活性的指數。
尿素酶活性=A-B
式中：A—A管的pH值；
B—B管的pH值。
6、注意事項
①應提早一天浸泡電極，保持電極清潔。
②有時樣品中的可溶物會附著在電極上，使電解質經過甘汞電極的多孔纖維流動速度降低，因此測定溶液的pH值時應快速。
