PEN-2在Arf6導致的胰腺癌細胞黏附連線解體中的分子機制探討

《PEN-2在Arf6導致的胰腺癌細胞黏附連線解體中的分子機制探討》是依託浙江大學，由魏樹梅擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：PEN-2在Arf6導致的胰腺癌細胞黏附連線解體中的分子機制探討
• 依託單位：浙江大學
• 項目負責人：魏樹梅
• 項目類別：青年科學基金項目

項目摘要

鈣粘蛋白（E-cadherin）功能失調促進胰腺癌發生浸潤和轉移。膜運輸小G蛋白Arf6活化促進E-cadherin從細胞間黏附連線處向胞質內吞，改變其正確定位從而增強細胞運動能力。該現象的分子機制尚未完全闡明。前期工作中利用大腸桿菌雙雜交系統篩選發現Arf6與γ分泌酶複合體亞基之一PEN-2結合,且用融合蛋白下拉實驗證實了PEN-2與Arf6的結合能力；PEN-2 siRNA抑制活化型Arf6Q67L導致的E-cadherin降解片段產生。提示Arf6可能通過與PEN-2的相互結合來調節γ-分泌酶的活化程度，藉助γ-分泌酶對E-cadherin裂解發揮上述功能。本課題首次將Arf6和γ-分泌酶功能相聯繫，通過探討PEN-2在Arf6誘導的黏附連線解體中的作用，驗證Arf6-PEN2-γ分泌酶-Ecadherin途徑假說，為尋找阻止胰腺癌細胞浸潤和轉移的分子靶向藥物提供理論依據。

結題摘要

上皮間葉轉換過程(Epithelial mesenchymal transition, EMT)在胰腺癌細胞的浸潤轉移過程中發揮了重要作用，闡明EMT的分子調節機制，對於發現抑制胰腺癌浸潤轉移的分子靶點具有重要意義。 本研究發現小G蛋白Arf6（ADP-ribosylation factor6）的調節因子GEP100（Guanine nucleotide exchange protein, 100）在胰腺癌浸潤轉移過程中發揮重要作用。1、GEP100的蛋白表達水平和胰腺癌細胞的浸潤能力成正相關。2、敲低GEP100可明顯降低胰腺癌細胞的體外基質浸潤能力，對細胞的粘附和移動能力無明顯影響。3、GEP100表達穩定敲低的細胞株的肝轉移能力明顯受抑。4、抑制GEP100蛋白表達導致E-cadherin表達的增高。上述研究表明，通過調節細胞E-cadherin蛋白表達，改變細胞間的黏附性，促使腫瘤細胞發生EMT可能是GEP100參與腫瘤細胞浸潤和轉移一個重要機制。GEP100有可能成為胰腺癌治療的一個潛在靶點。另一方面，Hedgehog-Gli1（Shh/Gli1）通路在調節胰腺癌細胞的EMT過程中也發揮重要角色，但是其具體的分子機制及下游效應因子未明。利用cDNA晶片分析，我們發現當利用siRNA阻斷Shh/Gli1通路時，S100家族的五個成員S100A2，S100A4， S100A6， S100A11 和S100A14的表達都明顯的被下調。而過表達Shh/Gli1時S100A4和vimentin的表達被同時上調，而E-cadherin蛋白的表達下降。S100A4 siRNA處理細胞可以逆轉Gli高表達所導致的細胞運動性增強。上述研究揭示了Shh/Gli1和S100A4之間的一個新的調節通路，提示S100A4可能是Shh/Gli調節的EMT的一個新的效應因子。