《PDZK1調控肝臟HDL受體SRB1影響膽固醇結石病發生的機制研究》是依託上海交通大學，由蔣兆彥擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：PDZK1調控肝臟HDL受體SRB1影響膽固醇結石病發生的機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：蔣兆彥
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
膽汁膽固醇過飽和是膽石病發生的必要條件。HDL受體SRB1多在肝細胞基底膜表達，能促進血漿中HDL的攝取並調節膽汁膽固醇的含量。我們的前期研究顯示膽石病人肝臟SRB1表達增加，但其原因及其導致膽汁膽固醇過飽和的機制未明。新近發現，SRB1在肝細胞膽小管側膜的表達協同參與了對膽汁膽固醇的分泌，這可能是膽石病發生的另一機制。另外，SRB1的表達受到PDZK1的調控。本課題將檢測SRB1蛋白在膽石病人肝細胞基底膜和膽小管側膜的分布及表達量的差異，分析其與PDZK1的關係。然後，在細胞水平和小鼠膽石模型，採用腺病毒包被技術上調及RNA干擾或化合物處理下調PDZK1表達，從正反兩方面研究上述處理對SRB1表達和HDL攝取的調節作用，以及對小鼠成石的促進和預防作用，進而提出PDZK1→SRB1→膽汁膽固醇過飽和→膽石病的發病途徑。以PDZK1為干預靶點，調控SRB1表達，可能是膽石病防治的新方法。
結題摘要
本課題主要的研究如下：（1）採用PDZK1過表達慢病毒載體，使HepG2細胞過表達PDZK1，能提高細胞對HDL膽固醇攝取能力；相反，採用特異性SiPDZK1干擾其表達，則降低對HDL膽固醇的攝取率。（2）成石飼料增加小鼠肝臟膽小管側膜膽固醇轉運蛋白Abcg5/g8表達，不改變基底膜側膽固醇轉運蛋白Abca1的表達。抑制Pdzk1 的表達，進而降低Srb1 mRNA和蛋白表達。FF能略微上調Pdzk1以及SRB1蛋白的表達，但對Srb1 mRNA表達的上調作用不顯著。成石飼料降低近段小腸膽固醇轉運蛋白Abcg5/g8以及Abca1的表達，FF則能上調其表達。成石飼料不影響Acat2的表達，但FF能上調其表達。（3）在人體肝臟SRB1和PDZK1的表達具有很強的正相關性，r=0.326, P＜0.01。該結果與PDZK1在肝細胞具有調節SRB1表達的作用一致。但是，膽石組和對照組之間的比較沒有顯著差異。（4）肝臟TGIF的mRNA表達具有顯著的性別差異，女性顯著高於男性。小鼠肝臟，TGIF的表達也有類似性別差異。將TGIF質粒和人ACAT2啟動子共轉染肝細胞HuH7，可以檢測到明顯的抑制作用。而TGIF對NCP1L1啟動子則起到正向調節作用。（5）將PDZK1過表達的慢病毒載體經腹腔注射成石飼料餵養小鼠4周，肝臟PDZK1表達增加，SRB1在總蛋白的表達未改變，但膜蛋白中SRB1表達增加。肝臟組織中與膽固醇代謝的相關基因中，LDLR、 ABCG5和G8上調，對ABCA1、SCP2、ACAT2和ABCB11的影響不大。（6）將SiPDZK1腺病毒載體經腹腔注射成石飼料餵養的小鼠，肝臟PDZK1蛋白的表達降低。肝臟膽固醇代謝相關的基因中ABCA1、SCP2、ABCG5、ABCG8分別上調，而ACAT2和LDLR的表達無差異。干擾組小鼠膽汁膽固醇飽和指數低於對照組。
