PD-1/PD-L1拮抗肽的篩選及其在腫瘤免疫治療中的套用研究

《PD-1/PD-L1拮抗肽的篩選及其在腫瘤免疫治療中的套用研究》是依託鄭州大學，由高艷鋒擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：PD-1/PD-L1拮抗肽的篩選及其在腫瘤免疫治療中的套用研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：高艷鋒
• 依託單位：鄭州大學

項目摘要

PD-1和它的配體PD-L1是T細胞活化過程中一對重要的負性共刺激分子，在誘導T細胞無能和免疫耐受維持方面起著非常重要的作用，並與腫瘤免疫耐受和逃逸相關，因此，研究利用PD-1和PD-L1作為腫瘤免疫治療的靶點具有重要的理論意義和套用價值。本項目擬通過噬菌體展示肽庫的方法，分別高通量的篩選針對PD-1和PD-L1的拮抗肽，利用凝膠遷移電泳和表面等離子共振技術分析拮抗肽與PD-1和PD-L1的親和力，進行結構最佳化與改造；通過體外刺激和轉基因小鼠體內免疫兩種方法進行CTL誘導，利用細胞因子ELISPOT實驗、LDH釋放實驗和流式技術分析探討拮抗肽的作用機制和作為抗腫瘤免疫佐劑的可能性；通過野生型小鼠和轉基因小鼠兩種荷瘤模型分別研究拮抗肽單獨套用和作為抗原肽免疫佐劑的體內抗腫瘤作用，並對其作用機制和毒副作用進行研究。本研究將為基於PD-1/PD-L1的藥物研究和開發提供新的思路和理論基礎。

結題摘要

PD-1/PD-L1作為T細胞活化過程中一對重要的負性共刺激分子，在誘導T細胞無能和免疫耐受維持方面有重要作用，並與腫瘤免疫耐受和逃逸相關，是腫瘤免疫治療的明星靶點。本項目首先運用基因工程的方法獲得PD-1/PD-L1的重組表達載體pET28a-hPD-L1、pET15b–hPD-L1 IgV和pET28a-hPD-1，並獲得高純的靶標蛋白。通過噬菌體展示肽庫的高通量篩選方法，獲得了一系列針對PD-1和PD-L1的拮抗肽，利用酶聯免疫吸附測試(ELISA)和表面等離子共振技術（SPR）分析拮抗肽與PD-1和PD-L1的親和力，並選擇高親和力的P1肽進行結構最佳化改造。細胞增殖MTT實驗證明篩選的拮抗肽不能直接影響腫瘤細胞的生長。通過流式分析了解不同腫瘤細胞PD-L1的表達情況，並挑選高表達PD-L1的腫瘤細胞B16和CT26建立相應的小鼠移植瘤模型，對拮抗肽進行體內活性分析，結果證明拮抗肽P1在降低腫瘤生長和延長小鼠生存期方面顯示出較好的抗腫瘤活性。本研究為PD-1和 PD-L1作為腫瘤免疫治療藥物開發提供了理論基礎。