《PAX6基因轉錄本在後發障形成中生物學功能的實驗研究》是依託天津醫科大學，由孫慧敏擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：PAX6基因轉錄本在後發障形成中生物學功能的實驗研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：孫慧敏
- 依託單位：天津醫科大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
白內障術後併發症- - 後發性白內障是導致視力再下降的最主要原因。病理顯示白內障術後晶狀體上皮細胞經歷了由增殖到凋亡的過程。本研究通過製備後發障動物模型，測定其後囊膜上PAX6基因兩個轉錄本的時空表達規律和α、β晶狀體蛋白、α平滑肌肌動蛋白的變化，分析兩個轉錄本對相關蛋白的影響和功能側重，探索在後發障發生過程中PAX6基因兩種轉錄本對晶狀體蛋白的調控；進一步通過構建PAX6兩個轉錄本的野生型表達載體和突變型表達載體，聯合前期工作中已製備的能同時沉默PAX6二個轉錄本的PAX6-siRNA慢病毒干擾載體為工具；用RNA干擾的方法研究兩個轉錄本對人晶狀體上皮細胞的作用，觀察晶狀體B3細胞系的增殖、凋亡及克隆形成能力及其對α、β晶狀體蛋白、α平滑肌肌動蛋白的調控，為探討後發障發病機理並為其防治方法建立初步理論基礎。為今後促進晶狀體的再生提供一種思路。
結題摘要
白內障術後後囊膜渾濁是術後重要的併發症，我們通過建立大鼠後囊膜渾濁模型並測定Pax6轉錄本的表達變化。然後在HLE-B3細胞系通過敲減及回復表達Pax6轉錄本，觀察其對B3細胞的影響。最後利用基因晶片技術進行全基因表達譜檢測觀察隨著Pax6轉錄本表達變化對下游基因的影響。結果是 1. 成功複製了大鼠後發障模型，構建了大鼠Pax6基因的質粒並進行測序，獲得大鼠Pax6兩個轉錄本的序列。檢測Pax6兩個轉錄本的表達，在手術後7天，Pax6兩種轉錄本的表達均有所增加，在術後14天時又有一定程度的回覆，至28天時降至最低。兩種轉錄本的表達趨勢比較相似。 2. 成功構建了Pax6 shRNA重組慢病毒載體，抑制Pax6基因表達後，B3細胞凋亡的數目成倍增加。 3. 敲減Pax6基因的表達水平後，單獨回復表達其中一個Pax6轉錄本，不但不能逆轉敲減Pax6造成的細胞活力下降、增殖減緩，反而加重了這種變化。特別是回復表達轉錄本2，導致了更明顯的細胞活力下降和增殖減緩，並且凋亡細胞數量也顯著的增加。 4. 基因晶片的結果顯示Pax6基因被敲減後，有224個基因表達被上調，144個基因表達被下調，Pax6兩個轉錄本的回覆表達，比Pax6的基因敲減，引起了更多與細胞周期和凋亡相關的基因表達的變化，包括WNT、p53信號通路的一些基因和Caspase相關的基因。
