《OPG/RANKL介導Ghrelin調控動脈鈣化的機制研究》是依託中南大學，由袁凌青擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：OPG/RANKL介導Ghrelin調控動脈鈣化的機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：袁凌青
- 依託單位：中南大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
動脈鈣化是血管壁發生的一種類似骨形成的主動調節過程，嚴重危害患者健康。血管平滑肌細胞（VSMCs）向成骨細胞分化是動脈鈣化的細胞學基礎。我們的前期研究發現Ghrelin可通過GHSR-1α/ERK途徑抑制VSMCs向成骨細胞分化，同時Ghrelin調節鈣化型血管平滑肌細胞（CVSMCs）的OPG/RANKL表達。本項目探討Ghrelin調控VSMCs OPG/RANKL表達的轉錄調節機制和細胞信號轉導通路；採用shRNA-OPG和腺病毒-Ghrelin分別低表達和過表達OPG和RANKL，闡明OPG/RANKL在Ghrelin緩解VSMCs向成骨細胞分化的分子機制。通過在動脈鈣化動物模型，構建Ghrelin過表達/OPG基因敲除小鼠，觀察Ghrelin在體內對動脈鈣化的影響及其機制。本項目在原有研究的基礎上，揭示動脈鈣化新的發病機制，為動脈鈣化防治提供新的作用靶點和理論依據。
結題摘要
動脈鈣化常見於糖尿病、終末期腎病和老年人，是心血管事件的重要危險因素，可作為糖尿病患者和腎衰患者的心血管事件、腦梗塞和截肢的獨立預測因子。Ghrelin是生長激素促分泌素受體(GHSR)的內源性配體，Ghrelin通過其受體GHSR在體內發揮著促進胃腸蠕動、降低血壓、調節骨代謝、促進細胞增殖和抑制炎症因子釋放等生物學作用。本項目採用首先採用β-甘油磷酸（β-GP）誘導血管平滑肌細胞向成骨樣細胞分化，通過檢測采ALP活性和Runx2表達和BMP-2 mRNA，證實β-GP可誘導血管平滑肌細胞向成骨樣細胞分化，是研究動脈鈣化的良好的細胞學模型。我們發現隨著血管平滑肌細胞向成骨樣細胞分化中RANKL mRNA和蛋白表達逐漸增強。對β-GP誘導的血管平滑肌細胞給予Ghrelin干預，可抑制ALP的活性和RANKL的表達，提示Ghrelin抑制血管平滑肌細胞向成骨樣細胞分化。我們進一步發現過表達RANKL阻斷了Ghrelin抑制血管平滑肌細胞向成骨樣細胞分化的作用。提示RANKL介導了Ghrelin抑制血管平滑肌細胞向成骨細胞分化的作用。細胞信號機制研究發現Ghrelin通過ERK/AKT途徑抑制RANKL的表達。採用細胞信號阻斷劑證實Ghrelin通過ERK和PI3K/Akt信號通路抑制血管平滑肌細胞向成骨樣細胞分化。同時我們在動脈鈣化模型小鼠OPG-/-小鼠中，採用腺病毒載體（Ad-Ghr）和和β-半乳糖苷酶腺病毒對照載體（Ad-Gal）建立Ghrelin過表達小鼠及其對照，採用western blot證實血管Ghrelin過表達構建成功，通過茜素紅染色染色和血管壁鈣含量測定，發現過表達Ghrelin可抑制動脈鈣化的發生。進一步採用免疫組化檢測血管壁OC、RANKL、RUNX2的表達，而Ghrelin過表達組的小鼠血管壁OC、RANKL、RUNX2的表達較陰性對照組和空白對照組減少。通過本項目的實施，證實Ghrelin是動脈鈣化的防治靶點，為探索動脈鈣化的發病機制和防治方法開闢新的思路和新途徑。
