NtGNL1在花粉管極性生長中調節後高爾基體轉運的機制研究

《NtGNL1在花粉管極性生長中調節後高爾基體轉運的機制研究》是依託浙江師範大學，由廖芳蕾擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：NtGNL1在花粉管極性生長中調節後高爾基體轉運的機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：廖芳蕾
• 依託單位：浙江師範大學

項目摘要

高等植物花粉管作為典型細胞極性生長的材料，被廣泛用來探討細胞極性生長的普遍機制。囊泡運輸與花粉管極性生長密切相關。已知ARF-GEF與其效應物參與調控囊泡的後高爾基體轉運，但其機制遠未明確。我們克隆了菸草ARF-GEF家族成員NtGNL1，發現其可作用於後高爾基體轉運。在本項目中擬進一步明確NtGNL1對特定囊泡的影響；通過標記後高爾基體途徑的細胞器，結合囊泡的活體追蹤觀察，定位NtGNL1作用環節；利用免疫共沉澱和pull-down技術，結合質譜分析，尋找和確認NtGNL1的效應物；以實時定量RT-PCR確定NtGNL1的上下游途徑。在此基礎上，了解菸草NtGNL1與NtGNL2在囊泡轉運中的作用關係，比較NtGNL1、NtGNL2的BFA敏感性及功能差異，探討該家族基因的進化演變。該項目的研究結果將明確NtGNL1調控後高爾基體轉運的具體分子和細胞機制，深化對花粉管極性生長機理的認識。

結題摘要

高等植物花粉管作為典型細胞極性生長的材料，被廣泛用來探討細胞極性生長的普遍機制。囊泡運輸與花粉管極性生長密切相關。已知ARF-GEF與其效應物參與調控囊泡的後高爾基體轉運，但其機制遠未明確。我們克隆了菸草ARF-GEF家族成員NtGNL1，發現其可作用於後高爾基體轉運。在本項目中我們在菸草花粉體外培養體系中建立NtGNL1的瞬時反義寡聚核苷酸(ODN) 抑制系統,驗證NtGNL1在花粉管中的功能，進一步明確NtGNL1對特定囊泡的影響；以半定量RT-PCR技術，探討了NtGNL1可能的的上下游途徑，結合ITRAQ蛋白定量技術確認NtGNL1的上下游途徑，及囊泡運輸和微管建成對極性生長的綜合影響，此部分的工作還在整理中。此外，我們分離了菸草中的NtGNL2序列，了解菸草NtGNL1與NtGNL2在囊泡轉運中的作用關係，比較NtGNL1、NtGNL2的BFA敏感性及功能差異，探討該家族基因的進化演變,該部分工作尚在進行中。該項目的研究結果將明確NtGNL1調控後高爾基體轉運的具體分子和細胞機制，深化對花粉管極性生長機理的認識。