《Nrf2-miR-233-NR2B通路抑制硝酸甘油誘導痛覺過敏的機制研究》是依託西安交通大學，由邸偉擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：Nrf2-miR-233-NR2B通路抑制硝酸甘油誘導痛覺過敏的機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：邸偉
- 依託單位：西安交通大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
痛覺過敏可導致偏頭痛慢性轉化。而我們的前期研究發現Nrf2激活劑可抑制硝酸甘油誘導的大鼠痛覺過敏，但目前Nrf2調節中樞敏化的機理尚待明確。NR2B表達增加介導中樞敏化已得到證實，而NR2B 基因的3’-UTR是miRNA-223靶點之一，最近研究發現Nrf2可上調miRNA-223的表達。據此我們推測Nrf2- miRNA-223-NR2B通路可能參與NTG誘導的痛覺過敏。本項目套用RT-PCR、免疫印跡及全細胞膜片鉗等闡明NR2B在NTG誘導的中樞敏化中的作用及Nrf2可能通過NR2B參與抑制痛覺過敏；雙螢光素酶報告基因、染色質免疫共沉澱等確立Nrf2、miRNA-223及NR2B的關係；進一步通過轉染過表達Nrf2和/或阻斷miRNA-223，觀察miRNA-223、NR2B-mRNA及NR2B的變化。研究結果有望揭示Nrf2抑制痛覺過敏的分子機制並為其成為新的治療靶點提供科學依據。
結題摘要
痛覺過敏可導致偏頭痛慢性轉化。前期研究發現Nrf2激活劑可抑制硝酸甘油誘導的大鼠痛覺過敏，其具體機理尚待明確。本研究首先選擇SPF級健康成年雄性SD大鼠，分為5組：NS對照組、ifenprodil+對照組、NTG組、NS+NTG組、ifenprodil+NTG組，套用von-Frey檢測機械性痛覺閾值，套用免疫螢光和免疫印跡檢測大鼠三叉神經脊束尾核（TNC）c-Fos、nNOS的表達，觀察到ifenprodil+NTG組眶周和前爪皮膚痛覺閾值較NS+NTG組顯著增加； ifenprodil+NTG組TNC中c-Fos、nNOS陽性細胞數及蛋白表達較NS+NTG組顯著減少，表明NR2B阻斷劑可抑制NTG誘導的偏頭痛大鼠TNC中樞敏化。其次， 將SD大鼠分為5組： NS組、NS+NTG組、NTG組、H2O+NTG組、SFN+NTG組。套用免疫螢光、免疫印跡檢測NR2B受體的表達，RT-PCR檢測NR2BmRNA的表達，發現NTG組NR2B陽性細胞數較NS組顯著增多、SFN+NTG組NR2B陽性細胞數較H2O+NTG組顯著減少； NTG組NR2B蛋白和NR2BmRNA表達水平較NS組顯著增高、SFN+NTG組NR2B蛋白和NR2BmRNA的表達水平較H2O+NTG組顯著減少，表明Nrf2激活劑萊菔硫烷可抑制NTG誘導的NR2B的表達。最後，利用原代培養的三叉神經節（TG）神經元，套用ELLISA檢測上清液CGRP濃度，結果發現SNP組CGRP的濃度較對照組顯著增高，SFN+SNP組CGRP的濃度較H2O+SNP組顯著減少，表明Nrf2激活劑萊菔硫烷抑制了NO供體SNP誘導的TG神經元CGRP的釋放。利用原代培養的TG衛星膠質細胞，套用免疫印跡檢測細胞IL-1β、Stat3蛋白表達，發現CGRP處理組較對照組IL-1β、Stat3蛋白表達增高，而keap1siRNA轉染後CGRP所誘導的IL-1β、Stat3蛋白表達減少，表明Nrf2可抑制CGRP介導的TG衛星膠質細胞的炎症反應。以上結果表明Nrf2通過調節NR2B受體抑制NTG誘導的痛覺過敏，並通過調節三叉神經節神經元CGRP的釋放及衛星膠質細胞的炎症反應參與抑制NTG誘導的痛覺過敏，為 Nrf2抑制痛覺過敏的分子機制並為其成為新的治療靶點提供了一定的科學依據。
