Notch1與RISK/SAFE/HIF-1α信號通路整合在I-postC保護中的作用及其機制

《Notch1與RISK/SAFE/HIF-1α信號通路整合在I-postC保護中的作用及其機制》是依託南昌大學，由劉季春擔任項目負責人的地區科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：Notch1與RISK/SAFE/HIF-1α信號通路整合在I-postC保護中的作用及其機制
• 項目類別：地區科學基金項目
• 項目負責人：劉季春
• 依託單位：南昌大學

項目摘要

在總結前人與自身工作基礎上，我們假設Notch1通過NICD/Hes1等因子，作為共同環節參與RISK/SAFE/HIF-1α信號通路整合，在I-postC中發揮重要作用，圍繞Notch1→NICD→Hes1→PTEN或DnaseⅠ→線粒體功能改變主線，採用腺病毒載體構建等技術，製備相應轉基因細胞與整體大鼠；確認已產生I-postC保護作用後，研究Notch1與Hes1不同表達水平對RISK/SAFE/HIF-1α等信號通路下游p-Akt、p-Stat3、o-PTEN及DNaseⅠ影響；探討N1ICD、Hes1與Akt、Stat3、HIF-1α間互動作用以及在細胞內的亞定位；通過mPTP開放等功能指標，追溯上述信號通路間整合對細胞線粒體功能影響；並在整體動物比較論證。可望闡明其在I-postC心肌保護意義及相關分子機制，且可作為新的靶點，為研製新型心肌保護藥物奠定的理論與實驗基礎。

結題摘要

我們依據“Notch1 通過NICD/Hes1 等因子，作為共同環節參與RISK/SAFE/HIF-1α信號通路整合，在I-postC中發揮重要作用”假設，圍繞“Notch1→NICD→Hes1→PTEN 或DnaseⅠ→線粒體功能改變”主線，在確認Notch1信號通路在心肌細胞H/R、IPC、IPost中激活基礎上，構建Notch1及Hes1腺病毒表達與干擾載體，製備Notch1及Hes1轉基因細胞與整體大鼠，建立缺血再灌注、缺血預適應、缺血後適應細胞與動物模型，依次檢測心肌細胞存活率、心肌細胞凋亡、活性氧、心肌酶譜、心肌梗死面積及左心功能改變，觀察Notch1信號通路的心肌保護效應，Western blot檢測PTEN、p-Akt/Akt、p-GSK-3β/GSK-3β、p-Stat3/Stat3、Bax、Bcl-xl、HIF-1α、DnaseI蛋白表達，從中探討Notch1信號通路與RISK/SAFE/HIF-1α信號通路相互整合作用；分離線粒體，Western blot檢測線粒體/細胞質CytC表達差異，流式細胞儀檢測線粒體膜電位，從而追溯上述信號通路間整合對細胞線粒體功能影響。我們實驗數據表明Notch1作為內源性心肌保護因子，通過與RISK/SAFE/HIF-1α信號通路相互整合，減少心肌細胞內活性氧產生，穩定線粒體膜電位，抑制線粒體通透性轉換孔開放，減緩心肌酶譜釋放，從而增強心肌細胞活力，減輕心肌細胞凋亡，縮小心肌梗死面積，改善左心功能，明顯減輕心肌缺血再灌注損傷。該課題已闡明Notch1內源性心肌保護作用意義及相關分子機制，並可作為新的靶點，為研製新型心肌保護藥物奠定的理論與實驗基礎。