《Notch信號通路在ALDH1+/Musashi+膽囊癌幹細胞中功能研究》是依託中南大學，由楊竹林擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：Notch信號通路在ALDH1+/Musashi+膽囊癌幹細胞中功能研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：楊竹林
- 依託單位：中南大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
膽囊癌是較常見的惡性消化系統原發腫瘤，發病和轉移機制有待研究。腫瘤幹細胞為腫瘤組織中僅有極少數具有成瘤潛能的細胞，具有自我更新和增殖等幹細胞特性。前期研究發現腫瘤幹細胞分子標誌物ALDH-1、Musashi-1表達水平與膽囊癌的病理分期和病人預後相關。流式細胞分選獲得原代人膽囊癌細胞，並能體外穩定傳代，初步體外體內試驗證實分選獲得的該細胞亞群具有腫瘤幹細胞特性。初步機制研究發現Notch信號通路可能在膽囊腺癌腫瘤幹細胞生物學功能中扮演重要角色。本項目套用膽囊腺癌腫瘤幹細胞為模型，深入研究Notch信號通路對乾性維持與自我更新，細胞增殖、侵襲、遷移能力及體外成瘤能力的功能影響。研究內容可望闡明ALDH-1和Musashi-1可作為膽囊癌中CSCs標記物以及其分子機制，發現潛在的治療靶標和診斷的生物標誌物，有望為臨床診斷和治療提供新策略和方法。
結題摘要
本研究通過CD133磁珠分選出CD133+膽囊癌幹細胞，通過流式檢測發現ALDH1、Musashi1在CD133+膽囊癌幹細胞中高表達，因此我們以CD133+、ALDH-1+、Musashi-1+膽囊癌幹細胞為模型，研究ALDH-1、Musashi-1和Notch信號通路對膽囊癌幹細胞的影響。研究發現膽囊癌幹細胞的增殖、遷移、侵襲、成球及體外成瘤能力均強於膽囊癌細胞，乾性相關基因在膽囊癌幹細胞中的表達高於膽囊癌細胞。通過RNA干擾，發現ALDH-1和Musashi-1可以促進囊癌幹細胞的增殖、遷移、侵襲、成球及體內成瘤。通過Notch抑制劑LY-411575處理膽囊癌幹細胞，發現LY-411575可以抑制膽囊癌幹細胞的增殖、遷移、侵襲、成球及體內成瘤，促進細胞凋亡。通過RNA干擾分別敲減Jagged1、DLL4、Hes1和Hey1，發現膽囊癌幹細胞的增殖、遷移、侵襲、成球及體外成瘤能力均受到抑制；細胞凋亡增加。在膽囊癌幹細胞敲減ALDH-1或Musashi-1後，發現Hes1和Hey1的表達下調。為了驗證ALDH-1和Musashi-1是否通過Hes1和Hey1影響膽囊癌幹細胞的特性，在已敲減ALDH-1或Musashi-1的膽囊癌幹細胞中，分別過表達Hey1或Hes1，比較膽囊癌幹細胞的生物學特性變化。研究發現在已敲減ALDH-1或Musashi-1的膽囊癌幹細胞中分別過表達Hey1或Hes1，膽囊癌幹細胞的增殖、侵襲、遷移、成瘤能力增強，細胞凋亡減少，這提示ALDH-1和Musashi-1通過Notch信號通路影響膽囊癌幹細胞的生物學特性。通過WB和qRT-PCR法檢測Notch信號通路相關基因、ALDH-1和Musashi-1在膽囊癌癌和癌旁組織中的表達，結果顯示這些基因在膽囊癌組織中的表達均高於癌旁組織。通過免疫組化法研究Jagged1、DLL4、Notch1、Notch3、Hes1和Hey1在膽囊鱗癌/腺鱗癌和膽囊腺癌中的表達及其臨床病理意義，研究發現Jagged1、DLL4、Notch1、Notch3、Hes1和Hey1的陽性表達與膽囊癌的臨床病理特徵密切相關。本研究發現ALDH1和Musashi1可以作為膽囊癌幹細胞的標誌物，ALDH-1和Musashi-1通過Notch信號通路影響膽囊癌幹細胞的生物學特性。
