《Nlrc5異常表達在急性肺損傷中的作用及靶向機制研究》是依託同濟大學，由彭艾擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：Nlrc5異常表達在急性肺損傷中的作用及靶向機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：彭艾
- 依託單位：同濟大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
急性肺損傷(ALI)致死率高，故闡明ALI致病機理是提高搶救成功率的關鍵。百草枯(PQ)誘導小鼠急性肺損傷是典型急性氧化應激損傷模型。前期採用新型全轉錄本基因晶片檢測了PQ致小鼠肺損傷全基因轉錄表達譜,經生物信息學分析確立：Nlrc5是PQ致肺損傷差異基因共表達細胞內信號傳遞網路最重要的核心調控基因；Western Blot證實小鼠6h肺組織Nlrc5增高，24h則顯著降低；茶多酚(EGCG)可顯著減低PQ中毒小鼠的死亡率。體外研究證實Nlrc5能同時顯著抑制NF-kB和I型IFN通路。故認為：Nlrc5分子下調致NF-kB和I型IFN通路活化是氧化應激肺損傷的關鍵機制。為此，採用反相蛋白微陣列技術和PQ中毒患者樣本，系統研究Nlrc5在氧化應激肺損傷中的調控機制和EGCG的干預作用及其與NF-kB的關係。為探索基於特異干預Nlrc5 分子和茶多酚聯合治療氧化應激肺損傷新方案提供實驗依據。
結題摘要
百草枯中毒死亡率高，主要是百草枯誘導的氧化應激器官損傷。但是百草枯如何誘導氧化應激的機理不清。本研究以證實Nlrc5參與百草枯中毒誘導的肺、腎損傷為切入點，系統研究了Nlrc5異常表達在急性肺損傷中作用的靶向機制。通過臨床患者資料、PQ誘導小鼠模型和Nlrc5基因敲出小鼠驗證了Nlrc5的致氧化應激作用；隨後發現該作用與Nlrc5 基因通過調控NK-KB通路過度活化的有關。免疫組織化學染色發現PQ中毒小鼠肺組織CD68細胞數顯著增高，Nlrc5 基因敲出小鼠顯著減低，同時伴有肺腎損傷的減輕。這些實驗證實了單核細胞的異常活化是PQ致器官損傷的關鍵環節。為此，在構建了斑馬魚百草枯中毒模型並進行系統評估模型的可靠性後，發現Rho和JNK-MMP13是斑馬魚巨噬細胞活化的主要通路。採用轉基因斑馬魚，篩選具有抑制單核細胞的異常活化的新化合物分子，篩選出還原型谷胱甘肽（Lgr），半胱氨酸（NAG），ZCL278（Cdc42抑制劑）和NSC（鳥氨酸核苷交換因子誘導的Rac GTPase 特異Rac 激活物）可顯著減低斑馬魚的死亡率。同時我們還驗證了前期百草枯中毒患者的代謝組學檢測的分析結果，確定了與百草枯中毒死亡相關的重要關鍵代謝分子，為百草枯中毒的分子分型提供了基礎。這些研究結果為我們下一步研究新型抗氧化應激干預藥物用於搶救百草枯中毒提供了新的線索。
