《Neuropilin-1 調控肝星狀細胞PDGF信號通路在肝癌微環境中作用研究》是依託西安交通大學，由耿智敏擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：Neuropilin-1 調控肝星狀細胞PDGF信號通路在肝癌微環境中作用研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：耿智敏
- 依託單位：西安交通大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
腫瘤微環境在腫瘤發生、發展過程中起有重要作用，NRP-1在腫瘤血管生成和侵襲轉移中的研究才處於起步階段，多集中在VEGF方面。本研究針對肝癌微環境中的血管周細胞-肝星狀細胞（HSC）。我們既往研究證實NRP-1作為PDGF的共受體，可增加HSC表面PDGF-Β/PDGFR-β結合，由此構想NRP-1與PDGF結合後通過細胞內下游MAPK、PI-3K及Rac-1信號通路首先增強HSC的活性，而後HSC作用於腫瘤細胞，促進腫瘤細胞的侵襲及轉移。本課題將通過組織學、細胞活性、信號通路及HSC與腫瘤細胞共培養等實驗證實上述構想。在此基礎上，建立裸鼠HSC與腫瘤細胞共注射皮下肝癌移植瘤模型，體內實驗證實阻斷HSC NRP-1轉導將抑制肝臟腫瘤生長。本研究將闡明NRP-1對HSC的作用機制及其在肝臟腫瘤微環境中所起作用，並將尋找相應的治療方法，對於肝癌的研究具有重要的科學價值。
結題摘要
原發性肝癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，近年來研究發現腫瘤微環境在腫瘤發生髮展過程中起到了至關重要的作用。本課題研究針對肝臟腫瘤微環境中特異性的血管周細胞-肝星狀細胞（hepatic stellete cells，HSC），探討Neuropilin-1通過肝星狀細胞PDGF信號通路在肝癌微環境中作用機制。已完成的研究工作包括：（1）組織學實驗證實Neuropilin-1與PDGFR-β、α-SMA在肝硬化、原發性肝癌肝星狀細胞中高表達，提示了Neuropilin-1可作為PDGF的共受體促進肝星狀細胞的活化；（2）通過原代培養獲得小鼠胚胎成纖維細胞（MEF）及與腫瘤細胞共培養，證實腫瘤相關成纖維細胞具有促進腫瘤細胞增殖，抑制腫瘤細胞凋亡的作用，小鼠胚胎成纖維細胞可以作腫瘤相關成纖維細胞用於腫瘤微環境的研究；（3）活化的肝星狀細胞LX2可促進肝癌細胞HepG2增殖及侵襲能力，索拉菲尼可通過抑制α-SMA的表達、抑制肝星狀細胞PDGF下游信號轉導通路（PI-3K，Ras）及下調肝星狀細胞上清液中的PDGF-BB和TGF-β1的表達，抑制HSC的活化，繼而抑制HepG2的增殖及侵襲；（4）構建了人NRP-1基因重組腺病毒載體及人NRP-1基因小分子干擾RNA慢病毒載體，為進一步研究NRP-1基因在肝星狀細胞促進肝癌發生髮展中的作用提供基礎。（5）PDGF增加HSC的趨化性，NRP-1 siRNA 抑制PDGF介導的HSC趨化性，NRP-1 過表達腺病毒載體增加PDGF介導的HSC遷移，可被Imatinib(PDGFR-β阻滯劑)抑制。（6）NRP-1 對PDGF介導的HSC PDGF下游蛋白級聯磷酸化反應信號通路的研究，結果證實NRP-1增加PDGFR-β的磷酸化與Rac-1的活性，與MAPK及PI-3K通路無關。（7）體內實驗證實HSC可促進HCC基質產生與沉積，並通過促進肝癌細胞增殖、抑制肝癌細胞凋亡從而促進HCC的生長。 NRP-1作用於HSC的上清液與肝癌細胞共培養實驗，NRP-1作用於PDGF介導的HSC與腫瘤細胞共注射對裸鼠皮下移植性肝癌生長的影響研究正在進行中。 本研究截止目前共完成文章9篇，已發表2篇，其中綜述2篇，培養碩士研究生5名，已畢業4名。 綜上，本研究從腫瘤微環境肝星狀細胞角度進一步闡明了肝癌發生機制，基本達到預計目標。
