《Nephrin蛋白修飾對其內吞結局及足細胞功能的影響及機制》是依託武漢大學，由梁偉擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：Nephrin蛋白修飾對其內吞結局及足細胞功能的影響及機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：梁偉
- 依託單位：武漢大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
Nephrin是足細胞連線相鄰足突和信號轉導的主要分子，在磷酸化和非磷酸化狀態均被內吞，但其內吞的意義、內吞的結局及其對足細胞功能的影響尚不清楚。本項目擬研究nephrin是否通過磷酸化-泛素化-內吞-溶酶體途徑降解，降低其表達、影響下游信號及足細胞功能。通過nephrin穩定轉染MDCK細胞與nephrin胞外段融合蛋白共培養，模擬nephrin連線的生理狀態，用點突變和抑制劑方法，評價nephrin磷酸化和泛素化修飾對nephrin表達、內吞途徑、下游信號和細胞骨架的影響；在高糖刺激的小鼠足細胞中，用不同方法干擾內吞和蛋白修飾，觀察不同蛋白修飾和內吞途徑對nephrin表達、下游信號和細胞骨架的影響；在鏈脲佐菌素糖尿病模型中進一步驗證nephrin修飾、內吞與蛋白尿的關係。明確不同蛋白修飾對nephrin內吞途徑、表達和足細胞功能的影響，進一步探討足細胞損傷與蛋白尿的發病機制。
結題摘要
Nephrin是足細胞裂孔隔膜區重要的信號轉導分子，可內吞入細胞內，但其內吞的意義、及其對足細胞功能的影響尚不清楚。本項目通過細胞生物學和生物化學的方法，擬研究糖尿病狀態下nephrin內吞的變化及可能的機制。研究發現：（1）Nephrin可進入快速轉運體（EEA1）、早期內體（Rab5）進入再循環系統參與細胞表面nephrin的自我更新。（2）生理狀態下nephrin被泛素化修飾，泛素化nephrin主要分布於核周的內質網。（3）nephrin的蛋白代謝半衰期為6小時，主要通過蛋白酶途徑講解。（4）糖尿病腎病早期主要表現為nephrin分布異常，體內、體外實驗證實高糖刺激可增加nephrin泛素化水平，泛素化nephrin進入蛋白酶體途徑降解。結論：nephrin通過早期內體進入再循環系統參與足細胞表面nephrin更新，部分nephrin被泛素化後進入蛋白酶體降解；高糖促進nephrin泛素化，增加蛋白酶降解，降低nephrin表達，進一步揭示糖尿病腎病早期足細胞損傷的分子機制。
