Naked2蛋白在腸癌中調控Wnt和EGFR信號通路機制研究

《Naked2蛋白在腸癌中調控Wnt和EGFR信號通路機制研究》是依託廈門大學，由胡天惠擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：Naked2蛋白在腸癌中調控Wnt和EGFR信號通路機制研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：胡天惠
• 依託單位：廈門大學

項目摘要

Wnt和EGFR信號通路與組織發育密切相關，其紊亂會導致癌變，我們發現Naked2同時參與調控這兩條通路。本研究擬改變腸癌細胞中Naked2的表達量，檢測Dishevelled(Wnt通路蛋白)和TGFa（EGFR通路蛋白）表達變化，明確Naked2對Wnt和EGFR的調控機制，並採用脈衝追蹤和雷射共聚焦顯微鏡方法分別測定Naked2與TGFa、Dishevelled結合的時間和空間上的差異和聯繫，闡明Naked2在維持細胞動態平衡中的作用；動物實驗擬檢測Naked2對裸鼠成瘤及腫瘤轉移的影響；臨床實驗擬採集100例腸癌樣本，比較Naked2在不同階段腸癌組織中的表達，測定Wnt和EGFR通路的活力，並提取術後未復發及半年內復發的切片樣本比較Naked2的表達，探索Naked2與腸癌惡變及預後的關係。本項研究將對闡明Naked2拮抗腫瘤的機制和開發Naked相關抗腫瘤藥提供重要指導作用。

結題摘要

項目重點研究了一個能夠同時調節EGFR和Wnt兩條信號通路的特殊蛋白分子Naked2在腸癌發生髮展中的作用機制。我們首先以正常腸上皮細胞NCM460為對照，對幾株腫瘤細胞SW480, Caco2, HCT-116的Wnt信號通路活力進行了測定，發現幾株腫瘤細胞中Wnt的活力均有顯著升高，而Naked2活力顯著下降。當Naked2表達升高時，Wnt信號通路的活力受到明顯抑制；相反，當Naked2表達被抑制後，Wnt活力增強。在幾株腸癌細胞中EGFR通路均被激活，而當過表達Naked2後EGFR通路活力被明顯抑制。進一步的機制研究發現Naked2能夠與Wnt信號通路重要分子Dishevelled-1在極化細胞的側邊膜結合併誘導該分子降解，從而抑制Wnt信號通路，而對於Dishevelled的另外兩個同源體Dishevelled-2和3則沒有明顯的降解作用。35S脈衝追蹤實驗進一步證實Naked2在生成初期，首先和TGFα結合併伴隨其到細胞膜，之後再與Dishevelled-1結合誘導TGFα降解。這樣的結果證明Naked2可以有效的調控Wnt信號通路和EGFR信號通路。接下來，我們研究Naked2對腸癌細胞增殖分化的影響，發現Naked2能夠有效抑制Caco-2細胞和HCA-7細胞株的增殖，也顯著抑制了3D培養狀態下的RKO腸癌細胞株的增殖。Naked2的生物學效應進一步用動物實驗進行驗證。裸鼠成瘤實驗表明Naked2可以有效的抑制小鼠腫瘤的生長，腫瘤轉移實驗也表明Naked2可以有效抑制肝轉移。最後，我們在臨床標本中對Naked2的功能進行了進一步驗證。利用自主研發的Naked2檢測ELISA技術，對收集的100多例腸癌樣本進行分析，發現Naked2表達水平均有顯著下降。進一步對其中四例進行了Western blot和免疫組化分析，發現了Naked2均有明顯的表達下降。通過這一系列的細胞、動物和臨床的實驗，證實了Naked2是調控腸道細胞動態平衡的重要分子，Naked2的缺失或表達抑制會促進腸癌的發生髮展。基於Naked2為靶點的研究將對於腸癌的預防及治療具有潛在的重要意義。 項目已經按照計畫全部完成並且做了進一步的深入。發表基金標註資助SCI論文5篇，總影響因子21分，申請人均為通訊作者。培養研究生7名。