《NY-ESO-1/MAGEA3/SSX2重組恥垢分枝桿菌的構建及其抗腫瘤作用的研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由薛瑩擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：NY-ESO-1/MAGEA3/SSX2重組恥垢分枝桿菌的構建及其抗腫瘤作用的研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：薛瑩
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
腫瘤免疫治療的重點集中在如何提高腫瘤抗原的免疫原性及如何避免腫瘤細胞的免疫逃逸，針對這個問題，我們利用恥垢分枝桿菌桿菌可非特異性地激發腫瘤患者的細胞及體液免疫應答，從而糾正患者免疫低下狀態，同時再利用腫瘤睪丸抗原(CTA)可特異性的提高機體對於腫瘤的細胞毒殺傷作用，構建一種可表達CTA抗原的重組恥垢分枝桿菌菌苗。該菌苗可表達兩到三種即能刺激機體產生細胞免疫應答又能產生體液免疫應答的睪丸腫瘤抗原（NY-ESO-1/MAGE A3/SSX2），我們將不同排列組合的rM.S通過普通動物實驗（BALB/c）篩選到具有較強免疫效力的重組恥垢分枝桿菌，然後再通過NOD-SCID-HU小鼠實驗驗證其在荷瘤小鼠模型中控制腫瘤生長及延長小鼠生存時間，以及其在免疫小鼠後抑制腫瘤生長及延長小鼠生存時間及疫苗的安全性，從而篩選到可用於腫瘤預防及治療的重組恥垢分枝桿菌菌株，為腫瘤疫苗的研製及特異性靶向治療奠定基礎。
結題摘要
通過克隆技術構建得到SSX2、NY-eso-1及MAGEA3兩兩結合的融合蛋白，即SSX2--NY-eso-1（SN）、SSX2—MAGEA3（SM）、NY-eso-1—SSX2（NS）、NY-eso-1—MAGEA3（NM）、MAGEA3—SSX2（MS）及MAGEA3—NY-eso-1（MN）組合的6種融合蛋白。通過對比蛋白表達量及western blot結果選取SN、NS、MS及SM，通過電轉的方法將連線有融合蛋白的載體轉入恥垢分枝桿菌中得到重組恥垢分枝桿菌（rM.S）。將成功轉入融合片段的恥垢分枝桿菌進行擴大培養製備標準rM.S菌株對Balb/c小鼠進行皮下注射。通過在正常Balb/c小鼠體內實驗驗證了重組恥垢分枝桿菌可以刺激機體使其產生SSX2、NY-eso-1及MAGEA3三種抗體的產生，同時CD4+T細胞亞群的比例增加，血清中IL-2、IFN-r及TNF-a等細胞因子水平較免疫前明顯提高。在荷瘤的NOD-SCID-Hu動物模型中繼續實驗，免疫重組恥垢分枝桿菌後瘤體生產速度受到抑制，但流式細胞技術實驗中發現CD4+T細胞亞群並未明顯增加，同時脾細胞增值效果也不好，故調整方案，用重組恥垢分枝桿菌免疫正常Balb/c小鼠，在抗體效價達到最高后取血清通過尾靜脈注射到荷瘤裸鼠體內進行治療， 40天后檢測瘤體體積及細胞因子表達，實驗初步達到預期結果，但仍需要進一步最佳化實驗方案。
