基本介紹
- 中文名：NRP-1通過VEGF/VEGFR2通路促進肝纖維化血管再生的作用研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：朱強
- 依託單位：山東大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
肝竇內皮細胞（HSECs）異常增殖、血管再生是肝纖維化的重要機制。申請者前期發現，神經纖毛蛋白（Neuropilin-1, NRP-1）可促進肝纖維化肝內纖維組織的異常沉積，肝纖維化肝組織HSECs中NRP-1表達明顯升高，並與肝血管異常增生呈正相關，但NRP-1在肝纖維化血管再生中的作用尚不清楚。文獻報導，NRP-1可調控胚胎及腫瘤組織血管生成，VEGF/VEGFR2通路在血管再生中發揮重要作用。申請者提出NRP-1可能通過該通路促進肝纖維化血管再生，本研究擬用臨床標本驗證NRP-1、VEGFR2表達與肝纖維化血管再生及臨床指標的相關性；採用人及小鼠原代HSECs探討NRP-1胞外區、胞內區作用於VEGF／VEGFR2信號通路的分子機制；採用肝纖維化小鼠動物模型闡明NRP-1體內調控肝纖維化血管再生的作用機制。該研究將為肝纖維化血管再生機制提供新觀點，並為探索抗肝纖維化治療提供新靶點。
結題摘要
肝纖維化的發生機制主要包括肝內纖維結締組織的過度沉積和血管異常再生。我們前期研究發現，神經纖毛蛋白1（neuropilin-1，NRP-1）在肝纖維化中表達升高並與血管再生密切相關。研究表明，NRP-1可促進肝纖維化纖維結締組織的異常沉積，同時，血管內皮生長因子/血管內皮生長因子受體（VEGF／VEGFR）對血管生成具有關鍵性調節作用，NRP-1作為VEGF的共受體，在血管生成中發揮著重要作用，但NRP-1是否通過VEGF/VEGFR2通路，調控肝纖維化血管再生及其細胞內信號傳導機制仍然不明確。該研究旨在進一步探討NRP-1在調控肝纖維化血管異常再生的作用及機制。收集肝硬化及正常肝組織，通過IHC染色檢測肝組織中NRP-1、VEGFR2，以及血管再生標誌物CD31及纖維化標誌物α-SMA的表達，結果證明NRP-1、VEGFR2與肝纖維化血管再生程度成正相關。在四氯化碳誘導的（CCL4）C57/BL小鼠肝纖維化模型中，通過HE和Massion染色評價模型組與對照組肝臟纖維化程度，並且通過Western Blot和qRT-PCR檢測模型組與對照組NRP-1和VEGFR2,得到相同結論。體外通過NRP-1慢病毒成功轉染人原代肝竇內皮細胞（HSEC）和臍靜脈內皮細胞（HUVEC），下調和上調NRP-1的表達，通過體外Transwell實驗、管腔形成實驗和CCK-8增殖實驗來測定HSEC和HUVEC細胞的遷移、管腔形成和增殖能力，結果表明 NRP-1能夠促進HSEC的成管、遷移，在HSEC血管生成中發揮重要作用。近來有研究發現，在HUVEC中，FAK及其激酶活性能夠從轉錄水平調節VEGFR2的表達。因此，我們利用FAK抑制劑PF573228處理敲低和過表達NRP-1的HSEC細胞，證明NRP-1 通過上調FAK及其激酶活性進一步調節轉錄和翻譯後水平的VEGFR2表達。接下來，通過Western Blot檢測VEGFR2下游各種信號分子，確定NRP-1通過VEGFR2依賴性PI3K/Akt通路調節HSEC血管成。最後通過體外組織培養，驗證阻斷NRP-1功能能夠抑制肝組織血管再生和纖維化。總之，NRP-1作為肝硬化治療的重要靶點，可具有抗血管生成和抗纖維化的雙重作用，特別是適用於那些對抗VEGF靶向藥抵抗的患者。
