《NOTCH信號介導喉癌發生髮展的作用及分子機制》是依託武漢大學，由陳始明擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：NOTCH信號介導喉癌發生髮展的作用及分子機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：陳始明
- 依託單位：武漢大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
近年來的研究證實Notch信號在大多數惡性腫瘤的發病中起了重要的促進作用，但Notch信號在喉癌發生髮展中的作用尚未見系統報導。Notch信號根據受體不同分四個亞型，與腫瘤發病相關的主要為Notch1、2。我們前期研究發現Notch1、2在喉癌Hep-2細胞中處於激活狀態，特異性阻斷Notch信號後能明顯抑制喉癌細胞增殖並誘導凋亡，該作用與c-Myc、AKT、hTERT等的抑制有關。本項目中我們擬系統研究：Notch1、2與喉癌臨床分期、病理分級及預後的關係；研究特異性抑制Notch1、2後對離體及在體喉癌細胞的治療作用；研究抑制Notch1、2治療喉癌是否依賴於端粒酶活性降低；研究Notch1、2調節端粒活性是否依賴於c-Myc、AKT及AMP/ERK通路。本項目的開展將明確Notch信號介導喉癌發生髮展的作用及分子機制，為開發喉癌治療新途徑提供依據，為同類型惡性腫瘤的治療提供實驗參考。
結題摘要
近年來的研究證實Notch 信號在腫瘤的發生和演進過程中有重要作用，紊亂的Notch信號可直接或通過與其他信號通路的互動作用間接引起腫瘤的發生，但關於Notch信號在喉癌發生髮展中的作用國內外尚未見系統報導。本課題中，我們採用量子點免疫螢光方法發現Notch1、2在喉鱗癌組織中呈特異性高表達，且其表達與患者T分級、臨床分期和淋巴結轉移呈顯著正相關。隨後，我們構建靶向 Notch1及Notch2 的shRNA 真核表達質粒，進一步研究證實其能有效抑制喉癌Hep-2細胞中Notch1及Notch2的表達；能有效抑制Hep-2細胞的生長增殖能力、侵襲轉移能力；能有效促進Hep-2細胞凋亡。這些作用與抑制NICD下游c-Myc 、AKT 、ERK通路，從而抑制端粒酶活性相關。通過轉染靶向Notch1及Notch2胞內段的過表達慢病毒載體，我們發現過表達Notch1及Notch2後，Hep-2細胞的增殖及侵襲能力增加，下游靶蛋白表達增加及端粒酶活性升高。同時，我們通過建立裸鼠異位移植瘤模型進行體內實驗，發現抑制Notch1及Notch2後，裸鼠的生長曲線及瘤體重量均受到顯著抑制。本研究結果證實Notch1、2在喉癌中處於激活狀態，特異性阻斷該通路可通過抑制c-Myc 、AKT 、ERK通路從而抑制端粒酶活性，最終抑制喉癌的發生髮展和侵襲轉移。此外，我們在人鼻咽癌CNE2細胞中運用CRISPR/Cas9系統實現Notch1及Notch2基因的特異性敲除，分別建立了Notch1及Notch2基因敲除的單克隆細胞株，並對其生物學行為及Notch靶蛋白表達變化進行了檢測，為精確研究Notch信號通路在頭頸部腫瘤中的作用機制提供了重要實驗模型和數據。本項目完成了既定目標，達到預期目的，為開發喉癌治療新靶點提供了理論依據，也為同類型惡性腫瘤的治療提供了實驗參考。
