《NFAT2沉默機制及對肝癌細胞凋亡影響》是依託江蘇大學，由張進擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：NFAT2沉默機制及對肝癌細胞凋亡影響
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：張進
- 依託單位：江蘇大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
肝細胞增殖和凋亡之間平衡的失控是肝癌發生的首要條件，肝癌發生髮展過程伴隨著凋亡內外通路的失活。在我們前期的工作發現NFAT家族在肝癌組織及細胞中是沉默的，其中NFAT2差異最大。恢復NFAT2表達能促進肝癌細胞的凋亡，伴隨MAT1A、FasL的表達上調，而Bcl-XL下調。我們推測肝癌中由於遺傳或表觀遺傳上的改變，NFAT2表達降低，抑制了下游靶基因MAT1A轉錄水平，導致胞內SAM的下降，直接或間接影響FasL和Bcl-XL這兩個重要凋亡基因的表達，抑制了細胞內外凋亡通路並有利於腫瘤細胞生存。為了印證這一推測，首先我們將從遺傳及表觀遺傳水平探討NFAT2沉默的機制。其次我們將從體內體外實驗研究NFAT2促肝癌凋亡機制，即NFAT2是否通過調控MAT1A表達及SAM水平來誘導凋亡。或者NFAT2能否通過直接調控凋亡相關基因FasL和Bcl-XL來激活內外凋亡通路而發揮促凋亡作用。
結題摘要
NFAT2被發現與乳腺癌、結直腸癌等多種腫瘤的發生髮展有密切相關性，目前與肝癌的相關性尚無文獻報導。我們通過免疫組化、Western blot和qRT-PCR發現NFAT2蛋白和mRNA均在在肝癌組織和細胞中低表達。進一步甲基化分析發現NFAT2啟動子在肝癌組織中處於高甲基化狀態，並且甲基化水平與mRNA成負相關。肝癌組織中NFAT2蛋白與腫瘤直徑及AFP水平密切相關。為了了解NFAT2在肝癌中的功能，我們構建了NFAT2過表達載體並將其轉入肝癌細胞中，通過CCK-8、細胞克隆形成、細胞周期分析和凋亡分析等方法發現NFAT2能抑制肝癌細胞的增殖和促進肝癌細胞的凋亡。我們進一步通過qRT-PCR篩選下游基因，發現過表達NFAT2能上調FasL的mRNA和蛋白表達。通過CHIP實驗進一步證實NFAT2能結合FasL啟動子來發揮其調控作用。Western Blot實驗發現過表達NFAT2能上調凋亡相關蛋白caspase8和caspase3表達，提示NFAT2可能是通過激活外凋亡通路來發揮其促凋亡作用。本項目首次發現NFAT2在肝癌細胞中的抑制增殖和促凋亡功能，為探討肝癌疾病的發生髮展的機制和今後肝癌靶向藥物的治療奠定了一定的基礎。
