N連線糖基化是一種新生肽鏈的共翻譯或翻譯後修飾方式,糖鏈通過與新生肽鏈中特定天冬醯胺(N-X-S/T,X!=P)的自由-NH2基連線,所以將這種糖基化稱為N連線糖基化。N連線糖基化的過程在內質網和高爾基體(Golgi apparatus,GA)中進行。合成和轉移在內質網中進行,其修飾過程在內質網和高爾基體中都存在。
N-糖的合成起始於內質網膜胞質一側,多萜醇(dolichol)磷酸化後形成活化態,在糖基轉移酶ALG7和ALG13/14的作用下將兩個N-乙醯葡糖胺(GlcNAc)與磷酸多萜醇連結,後在ALG1,ALG2和ALG11的作用下加上5個甘露糖(mannose)分子,通過Flipase轉運至內質網腔一側。在內質網腔中一系列糖基轉移酶的作用下形成一個具有2分子N-乙醯葡糖胺。