Myh14 基因功能的研究和人DFNA4耳聾疾病動物模型的建立

《Myh14 基因功能的研究和人DFNA4耳聾疾病動物模型的建立》是依託山東大學，由高建剛擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：Myh14 基因功能的研究和人DFNA4耳聾疾病動物模型的建立
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：高建剛
• 依託單位：山東大學

中文摘要

目前，超過50%的遺傳性耳聾病例是由於單基因突變引起的，包括肌球蛋白、連線蛋白、轉錄因子、離子通道或其他細胞組成。不同肌球蛋白超家族的成員以常染色體顯性或隱性性狀傳播綜合徵與非綜合徵性耳聾。Myh14基因是肌球蛋白超家族的成員之一，研究證明Myh14基因能引起常染色體顯性耳聾4（DFNA4），但致聾機理未知，Myh14基因在聽力中的功能仍不清楚。因此為解決這些問題，我們擬採用基因打靶技術，通過構建Myh14條件基因敲除載體，轉染胚胎幹細胞（ES細胞），再進行顯微注射製作小鼠，再結合相應組織特異性的Cre小鼠，製作能在特定組織（耳蝸）敲除 Myh14基因的小鼠，此小鼠也是人DFNA4耳聾疾病的動物模型；然後對獲得的Myh14基因敲除的小鼠進行一系列聽覺分析，探究Myh14基因在聽力中的功能，並闡明Myh14基因突變致聾的相關機理。

結題摘要

超過50%的遺傳性耳聾病例是由於單基因突變引起的，包括肌球蛋白、連線蛋白、轉錄因子、 離子通道或其他細胞組成。不同肌球蛋白超家族的成員以常染色體顯性或隱性性狀傳播綜合徵與非綜合徵性耳聾。Myh14 基因是肌球蛋白超家族的成員之一，研究證明 Myh14 基因能引起常染色體顯性耳 聾 4（DFNA4），但致聾機理未知，Myh14 基因在聽力中的功能仍不清楚。因此為解決這些問題，我們採用基因打靶技術，製作Myh14 條件基因敲除小鼠。我們構建了基因打靶載體。長PCR法篩選出 3個發生了正確同源重組的ES 細胞克隆。把經過篩選的 ES 細胞利用顯微注射注入 C57/B6 小鼠的囊胚中，獲得高嵌合小鼠。 高嵌合小鼠與C57/B6小鼠交配獲得F1代 floxed 小鼠。Floxed 小鼠與組織特異性的 Cre 小鼠，製作出了在特定組織（耳蝸）敲除 Myh14 基因的小鼠。使用石蠟切片進行形態學分析，顯示基因敲除小鼠與野生小鼠一樣整個柯蒂氏器形態沒有明顯變化，毛細胞形態完整。使用電生理儀對突變模型鼠進行分析，基因敲除小鼠耳蝸功能有所變化。我們製作的基因敲除小鼠是人 DFNA4 耳聾疾病的動物模型。