近年來，有報導Midkine(MK)對腫瘤新生血管生成具有明顯的調控作用。在國內，MK與食管鱗癌血管生成的有關報導較少。我們在對賁門癌血管生成及食管癌MK觀察的基礎上[2,3]，套用免疫組化方法檢測45例食管鱗癌組織中MK表達及與微血管密度的關係，初步探討MK與血管生成的可能關係。
1 資料與方法
1．1 資料 收集川北醫學院附屬醫院病理科2003年1月～6月間具有完整臨床病理資料的手術切除食管鱗癌45例。男性35例，女性10例，年齡38～72歲（平均57.9歲）。組織學上：高分化鱗癌17例，中等分化22例，低分化6例。術前均無放療、化療及其他治療史。另選10例正常食管組織作對照研究。
1．2 方法
1．2．1 試劑 羊抗人MK單克隆抗體及試劑盒購自美國Santa Crue公司，鼠抗人CD34單克隆抗體及試劑盒購自福州邁新公式。
1．2．2 免疫組化染色方法 將原病理常規石蠟包埋的蠟塊作4μm切片，每例作連續切片3張，分別作HE染色、MK，CD34免疫組織化學SP法染色。各組織切片常規脫蠟及水化後，依次按說明書完成免疫組化染色各步驟。所有切片均在同一實驗室，由同一技術人員使用同一批號試劑完成免疫組織化學染色。用已知陽性對照片作陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。
1．3 結果判斷 MK陽性判斷：凡細胞質和/或細胞膜出現清晰的棕黃色染色的細胞即為陽性細胞。結果以陽性細胞所占百分比表示。無MK抗體免疫反應細胞存在為陰性（-），MK抗體免疫反應細胞數≤30%為弱陽性（+），MK抗體免疫反應細胞＞30%為強陽性（++）。每張切片隨機選取5個代表性的視野計數100個細胞。腫瘤MVD測定方法：按Weidner報導的方法進行，即先在低倍鏡（×100）下觀察CD34陽性染色的微血管，選擇染色最多的區域，然後在高倍鏡（×200）下進行觀察，任何被CD34抗體染成棕黃色的內皮細胞或內皮細胞簇，有或無管腔，只要與其他結締組織成分有明顯區別，均作為一個微血管計數，計數5個高倍鏡下的微血管數，取其平均值作為微血管密度。
1．4 統計學處理 MK蛋白表達與各臨床病理指標間的關係處理採用χ2檢驗， MVD與臨床病理指標間的關係處理採用方差分析。
2 結果
2．1 食管鱗癌組織中MK蛋白的表達特徵與MVD的計數和分布特徵 在正常食管黏膜組織及癌旁組織中未見MK蛋白表達或僅見微弱表達，而在食管鱗癌中明顯表達，主要位於胞質和胞膜上（圖略）。45例食管鱗癌中35例為陽性，表達率為77.8%，其中14例為強陽性。 食管鱗癌細胞外間質中尚見纖維組織、小血管內皮細胞及彈力膜著色。血管密集處MK表達較高。食管鱗癌組織中血管內皮細胞陽性染色主要位於癌灶邊緣（圖略），且在腫瘤浸潤前緣血管密度高於其他區域，MVD均值為37.31±6.89。
