《MFG-E8介導的凋亡清除在慢性阻塞性肺疾病（COPD）發病中的作用》是依託華中科技大學，由崔天盆擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：MFG-E8介導的凋亡清除在慢性阻塞性肺疾病(COPD)發病中的作用
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：崔天盆
- 依託單位：華中科技大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
多個研究證實慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者肺部凋亡細胞明顯增加，乳脂球表皮生長因子Ⅷ（MFG-E8）在吞噬細胞和凋亡細胞之間起橋連作用，促進凋亡細胞的吞噬清除，對維持機體的內環境穩定起重要作用。我們曾研究發現適量MFG-E8通過結合凋亡細胞表面的磷脂醯絲氨酸，介導凋亡細胞清除，可減輕急性肺損傷，拮抗炎症反應，改善動物生存；本課題從凋亡清除分子MFG-E8出發，採用COPD患者、MFG-E8基因敲除小鼠、高表達MFG-E8小鼠、單核巨噬細胞系來研究MFG-E8在COPD發病中的作用機制，MFG-E8不足,導致凋亡清除減少、繼發壞死，導致失控性炎症反應和COPD的發病。適度增加MFG-E8有望促進凋亡清除和COPD肺部炎症消退,阻抑COPD的早期病變。
結題摘要
目的：探索MFG-E8在COPD發病中的表達變化以及MFG-E8是否通過影響COPD發病中巨噬細胞對凋亡細胞的清除這一機制進而參與到COPD發病之中。 方法： 1. 收集COPD病人及年齡性別匹配健康對照，ELISA檢測血漿中MFG-E8、IL-1β、TGF-β的表達水平，結合病人資料進行統計學分析。 2. 給予MFG-E8敲除小鼠和野生小鼠香菸煙霧暴露刺激3、6、9個月，HE染色評價小鼠肺臟內病理改變。Westernblot、ELISA 檢測小鼠血液及肺臟組織中MFG-E8表達，Westernblot 、Tunnel檢測小鼠肺臟內凋亡情況。 3. 香菸煙霧提取物（CSE）刺激RAW264.7細胞、腹腔巨噬細胞、肺泡巨噬細胞，Westernblot、ELISA 檢測MFG-E8表達。 4．CSE刺激rmMFG-E8 預處理的RAW264.7細胞並與螢光微球或凋亡細胞共孵育，評價其吞噬能力改變，Real-time PCR檢測rmMFG-E8對CSE刺激的RAW264.7細胞促炎性因子的表達的影響。 5．rmMFG-E8預處理RAW264.7細胞並給予CSE刺激後，免疫螢光法檢測Rac1在細胞內的定位。 結果： 1. COPD患者外周血漿MFG-E8表達顯著降低，TGF-β表達顯著升高而IL-1β表達無顯著性差異(p＜0.01)。COPD患者GOLDⅠ至GOLD Ⅳ外周血中MFG-E8表達水平逐漸下降(p=0.02)。COPD患者外周血MFG-E8表達水平與FEV1% predicted呈明顯正相關(p＜0.01)，與患者每年吸菸數量呈明顯的負相關(p=0.02)。 2. 香菸煙霧暴露小鼠肺臟及血清中MFG-E8表達降低，同時肺臟內凋亡細胞聚集增多，MFG-E8敲除後可顯著增加熏煙小鼠肺臟內凋亡細胞聚集。 3. 而在細胞學水平，CSE刺激可降低多種巨噬細胞MFG-E8的表達，在CSE刺激下，外源性給予重組MFG-E8可部分恢復RAW264.7細胞的吞噬功能，降低炎性反應，恢復Rac1在CSE刺激RAW264.7細胞膜上的定位。 研究意義：本課題首次發現MFG-E8在COPD中的表達變化，香菸暴露是MFG-E8降低的重要因素之一，MFG-E8參與調節CSE暴露下巨噬細胞的吞噬作用及炎性反應。以上研究為COPD的發生髮展及新靶點的探索提供了新思路。
