MAVS在多倍體魚天然免疫中的功能研究

《MAVS在多倍體魚天然免疫中的功能研究》是依託湖南師範大學，由馮浩擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：MAVS在多倍體魚天然免疫中的功能研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：馮浩
• 依託單位：湖南師範大學

項目摘要

世界首例兩性可育的異源四倍體鯽鯉群體在湖南師範大學被成功建立。異源四倍體鯽鯉、其二倍體父/母本和其三倍體雜交後代組成了一個親緣關係明晰的二/三/四倍體魚研發體系。目前有關該多倍體魚體系的天然免疫抗病機制尚不清楚。最近的研究表明線粒體抗病毒信號蛋白（MAVS）在魚類天然免疫抗病毒反應中起著重要的作用。本研究提出建立二/三/四倍體魚體外培養成纖維細胞系，並籍此研究MAVS在多倍體魚天然免疫系統中的功能的構想。本項目擬圍繞該構想開展如下研究：① 建立和鑑定二/三/四倍體魚尾鰭成纖維細胞系；② 克隆和表達二/三/四倍體魚MAVS基因；③ 分析和鑑定MAVS在二/三/四倍體魚成纖維細胞中的表達和定位；④ 研究MAVS在二/三/四倍體魚成纖維細胞中抗病毒的功能。本項目將揭示MAVS在二/三/四倍體魚天然免疫抗病毒反應中的功能機制，為將來系統研究二/三/四倍體魚的天然免疫機制打下堅實的基礎。

結題摘要

研究背景及研究內容 硬骨魚類主要依靠天然免疫來抵抗病原微生物的入侵。世界首例兩性可育的異源四倍體鯽鯉群體在湖南師範大學被成功建立。異源四倍體鯽鯉、其二倍體父/母本和其三倍體雜交後代組成了一個親緣關係明晰的二/三/四倍體魚研發體系。青魚是我國重要的經濟養殖魚類。有關多倍體魚體系及青魚的天然免疫抗病機制尚不清楚。本研究建立了二/三/四倍體魚及青魚體外培養成纖維細胞系，並籍此對上述魚類的RIG-I/MAVS/IFN信號通道在宿主天然免疫系統中的功能展開了系列研究。 重要進展和關鍵數據： 1. 建立了二倍體紅鯽、三倍體湘雲鯽、異源四倍體鯽鯉及青魚尾鰭成纖維細胞系，目前這些細胞系均已培養至100代以上；對這些成纖維細胞系的染色體數目、倍增時間、DNA含量等進行了鑑定。 2. 草魚呼腸孤病毒（GCRV）及鯉春病毒血症病毒（SVCV）均能在上述細胞系中進行裂解複製，表明該四種細胞系可以成為研究宿主天然免疫抗病毒研究的極好模式。採用SVCV感染二/三/四倍體魚成纖維細胞，採用GCRV感染青魚尾鰭成纖維細胞；然後對上述細胞攻毒前後的轉錄組進行了測序和系統研究。 3. 分別從二/三/四倍體魚成纖維細胞中及青魚尾鰭成纖維細胞中克隆了二/三/四倍體魚及青魚MAVS基因，對二/三/四倍體魚MAVS及青魚MAVS在宿主天然免疫抗病毒（諸如SVCV及GCRV）展開了系統研究。研究結果表明：二/三/四倍體魚MAVS及青魚MAVS均作用於宿主線粒體上；能夠通過下游信號通道激活干擾素表達，從而引發宿主抗病毒天然免疫反應。 4. 克隆了幾種二/三/四倍體魚乾擾素基因，鑑定了其在宿主天然免疫中的抗病毒功能。 5. 克隆了青魚RIG-I、LGP2、STING、TRAF2/3/6、IKKe、TBK1、IRF3/7、Viperin、Mx1、IFN等基因；對它們在宿主天然免疫抗病毒反應中的功能進行了鑑定。為系統闡明青魚天然免疫系統RIG-I/MAVS/IFN信號通道的抗病毒機制奠定了堅實的基礎。