《M2巨噬細胞影響腎臟系膜細胞的作用及其機制的實驗研究》是依託復旦大學，由張農擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：M2巨噬細胞影響腎臟系膜細胞的作用及其機制的實驗研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：張農
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
巨噬細胞對腎臟炎症反應和免疫應答等過程和結局具有重要影響。系膜細胞為腎小球腎炎和腎臟纖維化過程中的重要效應細胞之一。根據已有文獻報導和課題組前期研究發現，我們推測在腎炎病理過程中 M2巨噬細胞可能具有促進MsC的增生、影響MCP-1/CCL2及細胞外基質等表達的作用，並且可能在腎炎病變中具有一定的腎臟保護作用。本課題擬採用IL-4刺激大鼠BMDM獲得外源性M2表型巨噬細胞，並建立M2與大鼠MsC體外共培養體系和大鼠抗Thy-1系膜增生性腎炎模型，並以此觀察M2對MsC及其表達ECM/CCL2的影響，以及M2巨噬細胞在體外腎炎模型中是否具有潛在的治療作用。本課題預期研究結果將明確M2對MsC生長及細胞外基質作用的影響及其相關機制， 有利於進一步了解和認識巨噬細胞與系膜細胞的相互作用。該研究對於進一步開展腎炎病變治療的實驗研究也將具有重要的理論意義和套用價值。
結題摘要
本課題採用體外共培養方式研究M2巨噬細胞與MsC相互作用，及其可能機制；在大鼠抗Thy-1腎小球腎炎模型中回輸M0、M2兩型巨噬細胞，觀察上述干預對腎小球腎炎相關指標的影響，以及對MsC的增生及細胞外基質沉積的作用與相關機制。1、探討替代激活的M2巨噬細胞對大鼠系膜細胞的促凋亡作用及相關機制。採用大鼠骨髓源性巨噬細胞與大鼠系膜細胞共培養的模型(直接接觸共培養，M2巨噬細胞條件培養上清轉移兩種方式)，以Hoechst33258染色觀察細胞凋亡，流式細胞術檢測凋亡細胞比例；Western Blot檢測caspase3、Bcl-2、Fas、PI3K/Akt等表達；分析精氨酸酶-1的活性變化。研究結果提示M2巨噬細胞培養液上清所誘導的系膜細胞凋亡可能是由Fas介導的，由此可以認為M2細胞在腎臟炎症狀態下起到調控系膜細胞凋亡與增生平衡的作用。2、探討替代激活的M2巨噬細胞條件培養上清對大鼠系膜細胞FN分泌的調節作用及相關機制。採用大鼠骨髓源性巨噬細胞與大鼠系膜細胞共培養模型，(直接接觸共培養,M2巨噬細胞條件培養上清轉移兩種方式)，使用Western blot和/或PCR檢測med、50%M1-MPCM、50%M2-MPCM作用48小時後大鼠MsC中FN、p-ERK、p-JNK、p-p38、MCP-1、MMP3、TGF-β1與 TIMP-1的表達。研究結果提示M2巨噬細胞的條件培養上清可調節系膜細胞FN的分泌，TIMP-1、p-Erk、 p-p38可能參與上述效應。3、研究體外輸入骨髓來源的M2巨噬細胞對大鼠抗Thy-1腎炎模型的作用。通過螢光標記不同體外激活狀態的巨噬細胞，經腎動脈回輸至抗Thy-1腎炎大鼠體內，記錄大鼠腎功能相關指標(尿蛋白與尿肌酐水平)，Realtime-PCR方法觀察體外輸入骨髓來源M2巨噬細胞對抗Thy-1腎炎大鼠腎功能作用機制。在體外回輸M0與M2巨噬細胞的抗Thy-1腎炎大鼠腎組織中可發現螢光標記的巨噬細胞存在於腎小球內。與對照組相比抗Thy-1腎炎對照組大鼠尿液中尿肌酐與尿蛋白水平明顯升高。體外回輸M2巨噬細胞+抗Thy-1腎炎組中尿肌酐與尿蛋白水平顯著低於體外回輸M0巨噬細胞+抗Thy-1腎炎組。研究結果證實M2巨噬細胞的回輸不會使抗Thy-1腎炎大鼠的腎功能進一步惡化，MR的mRNA水平升高可能與M2的上述效應有關.
