《LncRNA4166-miRNA92a-HAND2調控軸逆轉肝纖維化的機制研究》是依託上海交通大學，由徐銘益擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：LncRNA4166-miRNA92a-HAND2調控軸逆轉肝纖維化的機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：徐銘益
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
長鏈非編碼RNA（lncRNA）在肝纖維化中的調控作用尚不清楚。我們前期研究顯示人肝星狀細胞（HSC）和肝硬化患者中lncRNA4166及其順式基因心臟神經嵴衍生表達轉錄子2（HAND2）增高、靶基因miRNA92a降低；它們協同參與了HSC活化而具有促肝纖維化的作用。本課題擬從細胞水平用質粒過表達和siRNA干擾lncRNA4166-miRNA92a-HAND2軸基因，探索其對HSC活化、凋亡等多種生物學功能和下游肝纖維化靶信號通路的影響。並構建Floxed基因法肝臟特異性HAND2敲除鼠和CCl4、DEN肝纖維化鼠模型，從體內角度闡述抑制lncRNA4166、HAND2或去阻謁miRNA92a逆轉肝纖維化的作用。最後觀察在不同病因慢性肝病中這些基因的表達及與預後的關聯。研究結果將有助於從lncRNA4166這一新視角探索肝纖維化分子機制，為臨床治療肝纖維化提供新的理論和實驗依據。
結題摘要
【目的】長鏈非編碼RNA（long noncoding RNA, lncRNA）在肝纖維化和肝細胞肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）中的機制尚不清楚，研究目的為了闡述其生物學功能和探尋治療新靶點。【方法】通過lncRNA晶片篩選和qPCR/Northern blot驗證人肝組織、肝星狀細胞(hepatic stellate cell，HSC)株（LX2）、肝癌細胞株（Hep3B，SUN387等）的lincSCRG1表達。生物信息學分析預測lincSCRG1的靶miRNA/基因，螢光素酶報告及RNA 結合蛋白免疫沉澱（RIP）法驗證其結合。細胞過表達/敲減lincSCRG1、miR26a、TTP後，MTT、TUNEL、流式細胞、Transwell和免疫螢光方法研究細胞功能變化。【結果】晶片在人肝硬化組織中篩選出1455個異常上調的lncRNAs，其中lincSCRG1上調13.62倍。（1）肝纖維化研究：lincSCRG1在人肝硬化組織和活化的LX2中表達顯著升高，且伴隨Bcl2、α-SMA和Col I mRNA上調。RBPDB軟體預測出TTP蛋白（一種RNA結合蛋白）與lincSCRG1具有結合位點，RNA pull-down和RIP法提示lincSCRG1靶向結合併抑制TTP。敲減lincSCRG1的LX2細胞活化、增殖和遷移減少；S期細胞減少而G2/M期細胞增加；凋亡增加。靶基因TTP通過抑制促炎促纖維化因子MMP2和TNF-α而發揮作用，過表達TTP後LX2活化、增殖、遷移受抑制和凋亡增加。當TTP缺失時，敲減lincSCRG1無法產生抑制肝纖維化作用。（2）肝癌研究：lincSCRG1在人B肝HCC肝組織和肝癌細胞（Hep3B、SUN387等）中高表達。生物信息學篩選出lincSCRG1 通過抑制miR26a 調控下游靶基因SKP2而起生物學功能，RIP和螢光素酶報告證實lincSCRG1和miR26a相結合併負調控後者。過表達lincSCRG1 或抑制 miR26a後，肝癌細胞呈增殖、克隆形成、侵襲活性增強的改變；而敲減 lincSCRG1 或過表達 miR26a 後，肝癌細胞出現相反的改變。【結論】在HSC中lincSCRG1通過靶向下調TTP蛋白而激活TNF-α和MMP2，產生誘導HSC活化、增殖、遷移和抑制凋亡的促肝纖維
