LncRNA調控子宮內膜癌PTEN表達的分子機制

《LncRNA調控子宮內膜癌PTEN表達的分子機制》是依託同濟大學，由廖虹擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：LncRNA調控子宮內膜癌PTEN表達的分子機制
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：廖虹
• 依託單位：同濟大學

中文摘要

PTEN突變或異常表達是子宮內膜癌發生的重要分子基礎，動物模型提示敲除PTEN促進子宮內膜癌發生。我們前期數據提示PTEN在子宮內膜癌中表達下調，而且部分長鏈非編碼RNA(lncRNA)調控PTEN表達，但其分子機制尚待進一步探討。根據晶片數據和軟體分析，部分lncRNA和PTEN具有某些相同microRNA作用位點，因此，我們提出假設：受病理條件或雌激素影響，異常表達的lncRNA通過與PTEN競爭性地結合可作用於兩者的microRNA，進而調控PTEN的表達，以及下游PI3K/AKT信號通路和腫瘤的惡性生物學行為。為證實以上假設，我們擬從分子、細胞、組織和整體動物等不同水平，通過正負向調控lncRNA和microRNA，結合RNA-IP、三維立體培養等技術，探討lncRNA對PTEN的調控機制；同時希望為子宮內膜癌的治療提供有效的靶標。

結題摘要

PTEN突變或異常表達是子宮內膜癌發生的重要分子基礎，動物模型提示敲除PTEN促進子宮內膜癌發生。我們前期數據提示PTEN在子宮內膜癌中表達下調，而且部分長鏈非編碼RNA(lncRNA)調控PTEN表達，在本研究中進一步確認PTEN在子宮內膜癌中低表達。根據晶片數據和軟體分析，發現長鏈非編碼RNA PTENP和PTEN具有相同micro19b作用位點，為了進一步確認PTENP1對PTEN的調控是通過micro19b調控的，我們首先檢測了microRNA19b對兩者的影響。轉染micro19b的mimic後，發現PTENP1的表達明顯降低，相反，套用其inhibitor處理後，PTENP1得表達顯著上升。說明micro19靶向調控該LncRNA的表達. 為了進一步驗證micro19b也作用於PTEN，我們通過real time PCR和WB的方法檢測micro19b對其mRNA和蛋白水平的影響。實驗發現micro19b mimic顯著抑制PTEN的表達。提示micro19b也調控PTEN的表達。 過表達PTEN 的3’UTR上調PTENP1的表達。說明PTEN 的3’UTR吸附了更多的micro19b,導致與PTENP1結合的micro19b減少，從而導致PTENP1表達增加。過表達PTENP1導致PTEN 表達增加。為了驗證是否存在雙向調控的ceRNA模式，我們構建了PTENP1的表達質粒，並且轉染細胞，發現其呈劑量依賴效應地上調PTEN的表達。推測是過表達的lncRNA吸附了更多的micro19b，導致與PTEN結合的micro19b減少，PTEN表達增加。過表達PTENP1導致子宮內膜癌細胞的增殖活性受到抑制。其可能的分子機制是該lncRNA通過ceRNA的模式調控PTEN的表達，PTEN上調，導致其下游的PI3K/AKT信號通路持續活化受到抑制，細胞增殖活性降低。