《LncRNA MALAT1調控高糖引發的腎小管上皮細胞凋亡的機制研究》是依託蘇州大學，由周玲擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：LncRNA MALAT1調控高糖引發的腎小管上皮細胞凋亡的機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：周玲
- 依託單位：蘇州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
腎小管損傷在糖尿病腎病（DN）的發生髮展中起重要作用，lncRNA MALAT1通過對功能蛋白的表達調控參與了DN的病理進程。我們的預實驗結果顯示，MALAT1在DN大鼠腎小管中表達升高，但作用機制有待進一步探討。本課題前期研究顯示SIRT1的去乙醯化活性下降在高糖下腎小管上皮細胞損傷中有重要調控作用。為此，我們提出假說，MALAT1可能通過影響SIRT1信號通路，參與高糖引發的腎小管上皮細胞凋亡。為驗證這一假說，我們將建立DN大鼠模型和體外腎小管上皮細胞高糖培養模型，藉助ChIP、染色體免疫共沉澱聯合定量 PCR、細胞轉染、信號通路阻斷等技術探討MALAT1調控SIRT1活性在DN腎小管上皮細胞凋亡中的作用，明確MALAT1通過腎小管凋亡促進DN發生的機制。本研究將從lncRNA MALAT1這個新視點為揭示DN腎小管損傷的發生機制奠定基礎，為糖尿病腎病的防治提供新的思路。
結題摘要
糖尿病腎病 (Diabetic nephropathy, DN) 是糖尿病最嚴重的併發症之一。DN發病機制複雜，其中腎小管損傷是DN重要的病理特徵之一。腎小管間質病變程度反映疾病的進展，且與腎功能損傷存在明顯的相關性。近期研究證明，長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）在糖尿病腎病中發揮重要作用。本課題組前期研究發現在糖尿病模型小鼠腎臟組織中LncRNA MALAT1表達上調，SIRT1表達下調。有研究發現高糖環境抑制SIRT1去乙醯化活性，引起腎小管上皮細胞的損傷。此外，Foxo1在糖尿病腎病大鼠腎皮質的活性降低，抑制足細胞凋亡，但對腎小管損傷的影響尚未報導。通過生物信息軟體預測到lncRNA MALAT1可能與Foxo1存在結合位點，Foxo1可能與SIRT1啟動子區存在結合位點。這提示LncRNA MALAT1可能會與Foxo1和SIRT1共同參與腎小管損傷。研究內容1.構建糖尿病小鼠模型，檢測糖尿病小鼠與正常小鼠中MALAT1、SIRT1和Foxo1的表達。2.高糖處理腎小管上皮細胞HK-2，檢測MALAT1和SIRT1的表達變化。3.高糖處理HK-2細胞並敲低MALAT1的表達，檢測Foxo1和SIRT1的表達。4.RNA免疫沉澱和RNA pull-down檢測正常HK-2細胞和高糖誘導的HK-2細胞中，MALAT1和Foxo1是否結合。5.CHIP實驗檢測正常HK-2細胞或高糖誘導的HK-2細胞或高糖誘導的MALAT1敲低的HK-2細胞中Foxo1和SIRT1啟動子之間是否結合。重要結果1.糖尿病小鼠腎組織中MALAT1表達上調，而SIRT1表達下調。2.高糖處理HK-2細胞後，MALAT1表達上調，而SIRT1表達下調。此外，MALAT1敲低可以逆轉高糖誘導的SIRT1表達下調。3.HK-2中MALAT1與Foxo1結合，且高糖促進了MALAT1和Foxo1的結合。4.HK-2中Foxo1與SIRT1結合，且高糖抑制了Foxo1和SIRT1之間的結合，但是MALAT1的低表達逆轉了這個結果.關鍵數據及科學意義糖尿病小鼠腎組織和高糖處理的HK-2細胞中MALAT1表達上調，且MALAT1的干擾逆轉了由高糖引起的細胞活力降低。說明MALAT1可作為治療糖尿病中腎小管損傷中的潛在靶標。
