《KIR2DS2和KIR2DL5受體對B肝患者NK細胞功能的影響及其機制》是依託山東大學，由盧志明擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：KIR2DS2和KIR2DL5受體對B肝患者NK細胞功能的影響及其機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：盧志明
- 依託單位：山東大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
B型肝炎病毒（HBV）感染是我國常見的傳染性疾病，NK細胞在HBV感染及轉歸中發揮重要作用，KIR基因家族參與了NK細胞抗病毒免疫應答的調節。前期研究發現KIR2DS2為HBV感染的易感基因，KIR2DL5為保護基因。本課題擬利用SSP-PCR及流式細胞術篩選出不同KIR2DS2和KIR2DL5表型的B型肝炎患者 NK細胞，檢測其KIR2DS2和KIR2DL5表達水平，研究不同KIR表型對NK細胞殺傷活性、細胞因子分泌功能的影響及其受體通路機制；另外選取NK92細胞系，利用RNA干擾及基因轉染技術構建不同KIR2DS2和KIR2DL5表型的NK92細胞系，檢測不同KIR表型對NK92細胞殺傷活性和細胞因子分泌功能的影響。探討HBV感染中，KIR2DS2作為易感基因，KID2DL5作為保護基因的潛在細胞和分子機制，為B肝感染高危人群的篩查和干預提供理論基礎。
結題摘要
研究背景：NK細胞在B型肝炎病毒感染過程中發揮了重要的作用，KIR參與了NK細胞抗病毒免疫應答的調節。前期研究發現KIR2DS2為HBV感染的易感基因，KIR2DL5為保護基因。 目的：探討KIR2DS2作為易感基因、KIR2DL5作為保護基因的潛在的細胞和分子機制。 方法：1.利用SSP-PCR進行KIR基因分型，篩選不同KIR2DS2、KIR2DL5表型的慢性B型肝炎感染患者（CHB）組、自限性B肝患者(SR)組、B肝疫苗無應答組及健康對照組，並對各組間KIR基因頻率進行比較；2.進行KIR基因配體HLA-Cw基因分型分析；3.免疫磁珠法分離CHB、SR組的外周血NK細胞進行培養；4.LDH釋放法研究不同KIR表型的NK細胞的殺傷活性，並用單克隆抗體CDl58f封閉處理NK細胞後與體外培養的K562細胞共培養，檢測外周血NK細胞對靶細胞的體外殺傷活性；5.用Real-time PCR的方法檢測外周血單個核細胞（PBMC）KIR的表達水平。 結果：1.成功篩選出了不同KIR2DS2、KIR2DL5表型的CHB、SR、無應答組及健康對照組；2. 通過SSP-PCR進行KIR基因分型，發現疫苗無應答組KIR3DS1基因的陽性率較健康對照組升高；3. CHB組HLA-Cw03基因的陽性率較健康對照組及疫苗無應答組高，疫苗無應答組HLA-Cw02和HLA-Cw04基因表型頻率較健康對照組升高；4.免疫磁珠法分離出CHB、SR組的外周血NK細胞；5.同一個體對K562細胞不同效靶比之間NK細胞的殺傷活性有一定差異，抗CD158f單抗封閉2DL5後，NK細胞對K562細胞的殺傷活性分別均較阻斷前降低，CHB 2DL5-組NK細胞對K562細胞的殺傷活性較SR 2DL5+組、SR 2DL5-組低。 結論：1. KIR3DS1基因可能與機體對B肝疫苗的無應答狀態有關；2. HLA-Cw03可能是B肝持續感染的易感基因，HLA-Cw02和HLA-Cw04可能是下調抗-HBs 應答水平的等位基因；3.同一個體對K562細胞不同效靶比之間NK細胞的殺傷活性有顯著性差異；4.NK細胞對靶細胞的殺傷效應與其KIR的基因型、表型均有一定的相關性。
