《HnRNP A2/B1在乳腺癌細胞中的作用及分子機制》是依託廈門大學，由石松林擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：HnRNP A2/B1在乳腺癌細胞中的作用及分子機制
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：石松林
- 依託單位：廈門大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
HnRNP A2/B1參與特定mRNA的可變剪接、核質轉運與翻譯調控。我們前期工作發現：hnRNP A2/B1是多種癌細胞誘導分化後出現的共同差異核基質蛋白；在乳腺癌等腫瘤中發生核-質定位變化並與多種分化相關蛋白共定位。前期結果提示它是細胞癌變與逆轉的一個關鍵調控節點，但具體機制不清楚。本課題擬研究:① 腫瘤細胞中hnRNP A2/B1的異構蛋白表達規律；②hnRNPA2/B1異構蛋白的相互作用蛋白質組，構建相互作用蛋白分子網路；③ hnRNPA2/B1異構蛋白調控的下游靶mRNA種類及剪接型，分析其參與調控的通路網路；④ hnRNP A2/B1沉默對乳腺癌細胞惡性表型的影響。通過上述研究，揭示腫瘤細胞中hnRNP A2/B1異構蛋白表達規律、相互作用蛋白網路及下游靶mRNA涉及的通路網路，從而闡明hnRNPA2/B1在乳腺癌中作用機制擔戲勸，為腫瘤的機理研究、汽故茅臨床診斷和治療提供一個新靶點。
結題摘要
hnRNPA2/B1參與RNA加工、可變剪接和基因調控，在多種腫瘤中高擔少葛記表達，但其乳腺癌中作用與機制還不清楚。本項目為了探究其在企訂乳腺癌中的具體作用與機制，通過CRISPR/CAS9構建穩定敲除hnRNPA2/B1的MCF-7和MDA-MB-231細胞系，檢測其對增殖、遷移和侵襲等重要功能表型的影響，並進行了mRNA、非編碼RNA和環狀RNA的測序分析研究，和hnRNPA2/B1互作蛋白的組學研究，分析研究其恥簽辣影響的分子機制；在體內的動物研究模型上，我們通過裸鼠移植瘤實驗，研究了A2/B1對乳腺癌細胞的成瘤能力，生長能力的影響。 細胞模型研究結果：增殖與凋亡實驗、transwell等實驗結果顯示，敲除hnRNPA2/B1會抑制細胞的增殖和凋亡，但卻促進細胞的遷移和侵襲能力。這些變化的表型可以被重新表達的hnRNPA2/B1逆轉。 Western blot和定量PCR對相關分子標記基因的檢測也證實了上述結論。動物實驗結果：敲除hnRNPA2/B1顯著影響了乳腺癌細胞的成瘤能力和血管生成能力。組學研究結果： hnRNPB1相互作用蛋白進行KEGG信號通路及功能分析，hnRNPB1相互作用蛋白主要涉及到的KEGG信號通路有RNA運輸、RNA的降解、TCA循環、細胞增殖、氧化磷酸化、丙酮酸代謝、阿爾滋海紙祖院備默氏病、蛋白酶體、細胞周期的進程、細胞粘附、細胞凋亡等。轉錄組測序結果提示，敲除連牛漏hnRNPA2/B1抑制了多個增殖、凋亡、遷移和侵襲有關的信號通路。可變剪接分析顯示，與遷移和凋亡相關的RON、Caspase9、c-FLIP、PLK3和Bim等基因的mRNA的可變剪接受到了hnRNPA2/B1的影響，可能參與了遷移和凋亡的調控。 本項目研究結果顯示，hnRNPA2/B1是乳腺癌的關鍵調控蛋白，它的高表達促進癌細胞的增殖，低表達卻能促進腫瘤的轉移，這可能是通過它影響的基因可變間接事件實現的。hnRNPA2/B1在乳腺癌中的獨特作用可能參與了乳腺癌異質性的形成，可望成為乳腺癌治療的重要靶點。
