《HIF-1α調控GR在庫欣病糖皮質激素抵抗中的機制研究》是依託上海交通大學，由張晨冉擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：HIF-1α調控GR在庫欣病糖皮質激素抵抗中的機制研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：張晨冉
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
庫欣病具有極高的死亡率，糖皮質激素受體（GR）表達下調所引起的糖皮質激素抵抗是重要的發病機制之一，但目前尚無有效的治療方法。我們前期實驗發現，低氧促進AtT-20細胞GR的表達，同時用地塞米松（DEX）處理細胞後，GR的表達會下調，下調程度與缺氧程度呈正相關；通過CO-IP實驗，我們發現了HIF-1α-GR複合體的形成。相反，沉默HIF-1α後GR的表達即上調。據此，我們推測在低氧和DEX共存的微環境中，HIF-1α對GR的調控方式可能為蛋白-蛋白的直接作用。本項目擬通過構建HIF-1α和GR不同片段缺失的突變體、基因轉染、GST標籤等手段確認兩者結合的特異片段，驗證GR的表達下調依賴HIF-1α-GR複合體的形成；明確HIF-1α-GR複合體對GR泛素化的影響；並在裸鼠庫欣病模型上驗證該機制；同時檢測HIF-1α抑制劑對糖皮質激素抵抗的改善作用，從而為庫欣病的藥物治療提供新靶點。
結題摘要
庫欣病具有極高的死亡率，糖皮質激素受體（GR）表達下調所引起的糖皮質激素抵抗是重要的發病機制之一，但其機制不明，也無有效的治療方法。我們前期實驗發現，低氧促進AtT-20細胞GR的表達，同時用地塞米松（DEX）處理細胞後，GR的表達會下調，下調程度與缺氧程度呈正相關；通過CO-IP實驗，我們發現了HIF-1α-GR複合體的形成。相反，沉默HIF-1α後GR的表達即上調。據此，我們推測在低氧和DEX共存的微環境中，HIF-1α對GR的調控方式可能為蛋白-蛋白的直接作用。為了證實該假說，我們在本項目中按計畫研究了以下內容：1、低氧環境下，驗證HIF-1α對GR 轉錄活性的影響；2、驗證低氧和地塞米松共存的微環境中，HIF-1α-GR 複合體的形成及其引起GR 降解的具體機制；3、建立皮下成瘤製備裸鼠庫欣病模型以驗證HIF-1α抑制劑LXY6006對糖皮質激素抵抗的改善作用。我們取得了以下研究成果：1、在庫欣病中，HIF-1α和GR之間存在轉錄水平和翻譯後水平的相互作用。2、缺氧和DEX共存時HIF1a通過泛素化蛋白酶體途徑導致GR下降。3、在裸鼠模型中驗證了HIF1a抑制劑對於庫欣病的治療效果。
