HIF-1α△ODD與HSP72基因共修飾的ADSCs促進缺血組織成活的研究

《HIF-1α△ODD與HSP72基因共修飾的ADSCs促進缺血組織成活的研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由余厚友擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：HIF-1α△ODD與HSP72基因共修飾的ADSCs促進缺血組織成活的研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：余厚友
• 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學

中文摘要

及時高效地促進移植組織的血管化有利於移植後血液循環重建，但血管化過程需要一定的時間，此時期內組織仍處於缺血狀態，需要進行保護干預。大量研究表明，缺氧誘導因子-1α（HIF-1α）基因治療能明顯促進有完整功能的血管大量新生，它的突變型HIF-1α△ODD解決了其生物半衰期短的缺陷；而熱休克蛋白72（HSP72）具有組織保護功能，可有效保護移植組織血管化前的缺血損傷。課題組在以往研究基礎上，提出套用HIF-1α△ODD和HSP72共轉染異體脂肪組織源性幹細胞（ADSCs）來促進缺血移植組織的成活，從體外及體內實驗來證實其促組織血管新生與血運重建、組織細胞保護的效果和機制。套用異體ADSCs作為載體，可以讓目的治療基因高效表達時套用，而且發揮其細胞治療的促血管新生作用。以期建立一種高效、操作性強、安全、代價小的促進缺血移植組織存活的新方法，為其臨床套用奠定基礎。

結題摘要

項目完成情況：基本完成了計畫書內容，並根據實驗過程中的變化及時進行了部分調整，達到了預期目的：高效地促進移植組織的血管化有利於移植後血液循環重建，但血管化過程需要一定的時間，此時期內組織仍處於缺血狀態，需要進行保護干預。大量研究表明，缺氧誘導因子-1α（HIF-1α）基因治療能明顯促進有完整功能的血管大量新生，它的突變型HIF-1α△ODD 解決了其生物半衰期短的缺陷；而熱休克蛋白72（HSP72）具有組織保護功能，可有效保護移植組織血管化前的缺血損傷。因此，課題組在以往研究基礎上，提出套用HIF-1α△ODD 和HSP72共轉染異體脂肪組織源性幹細胞（ADSCs）來促進缺血移植組織的成活，從體外及體內實驗來證實其促組織血管新生與血運重建、組織細胞保護的效果和機制。實驗進行中，發現NIH3T3細胞較脂肪幹細胞更易於臨床套用，易於培養、冷凍保存和復甦，易於轉染。構建了重組慢病毒Lenti/HIF-1αΔODD/EGFP,並進行鑑定。獲得了3個穩定轉染的細胞系：Lenti/HIF-1αΔODD/EGFP 轉染的NIH3T3細胞、 Lenti/VEGF165/EGFP 轉染的NIH3T3細胞 和 Lenti/EGFP 轉染的 NIH3T3細胞。證實NIH3T3細胞在大鼠體內的至少可以存活3周。移植Lenti/HIF-1αΔODD/EGFP 轉染的NIH3T3細胞到大鼠皮瓣下可以促進血管新生和成熟，縮短皮瓣斷蒂時間。體外培養了人ASCs，觀察了培養特性，及與與家兔異同。進行了重組慢病毒Lenti/HIF-1αΔODD/EGFP的構建，HSP72重組腺病毒對ASCs的轉染和鑑定，HSP70轉染ADSCs促進脂肪移植成活的研究。取得的成果：通過本課題的研究，發現HIF-1α△ODD 和HSP72的基因治療與異體的脂肪組織源性幹細胞及異體的成纖維細胞均能促進缺血移植組織的血管新生，血運及時重建，基本建立一種高效、操作性強、安全、代價小的促進缺血移植組織存活的新方法，為其臨床套用奠定基礎。相關的研究結果已經發表SCI收錄論文1篇，投出2篇。