Glypican-5抑制肺腺癌淋巴管生成和淋巴結轉移的機制研究

《Glypican-5抑制肺腺癌淋巴管生成和淋巴結轉移的機制研究》是依託蘇州大學，由楊欣擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：Glypican-5抑制肺腺癌淋巴管生成和淋巴結轉移的機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：楊欣
• 依託單位：蘇州大學

項目摘要

GPC5是前期篩選獲得的一條與肺腺癌淋巴結轉移程度顯著負相關的抑癌基因。已發現：①過表達GPC5的肺腺癌細胞株H1693與人淋巴管內皮細胞hLECs共培養後，淋巴管形成能力及細胞活力顯著下降；②人肺腺癌免疫組化顯示GPC5表達與淋巴管密度負相關；③表達譜晶片、生物信息學分析及驗證提示：過表達GPC5可下調促淋巴管生成因子FGF2表達。故我們提出“GPC5 通過調控FGF2 信號通路抑制肺腺癌淋巴結轉移”這一科學假說，並擬以兩種高淋巴轉移性肺腺癌細胞株和hLECs為對象，採用過表達/沉默策略，進行體內外實驗，證實GPC5可抑制淋巴管生成及淋巴結轉移；以FGF2為機制線索，闡明GPC5抑制肺腺癌淋巴結轉移的分子機制；結合高通量組織晶片，臨床大樣本驗證GPC5-FGF2通路與淋巴結轉移的相關性。有關GPC5抑制肺腺癌淋巴結轉移的功能和機制研究國內外尚未見報導，本研究將為肺腺癌防治提供新思路。

結題摘要

研究背景： 肺癌是常見的腫瘤，其死亡率在因癌症死亡的患者中位居首位。磷脂醯肌醇蛋白聚糖-5（glypican5，GPC5），屬於硫酸類肝素蛋白多糖（heparan sulfate proteoglycans， HSPGs）家族，其生物功能在肺癌細胞的浸潤和進展中的作用有待揭示。 研究方法： 採用慢病毒載體構建了兩株GPC5過表達的肺癌穩轉細胞株(H1693 and H2009)。利用ExoQuick-TCTM外泌體分離試劑盒，分離了肺癌細胞分泌的外泌體。通過透射電鏡和WesternBlot對外泌體進行了表征。通過CCK8試劑盒檢測了淋巴管內皮細胞（hLECs）和肺癌細胞的增殖水平。通過劃痕時間檢測hLECs的遷移能力。通過成管實驗評價了hlECs的成管能力。利用miRNA高通量測序，分析了外泌體中的miRNAs含量差異。通過生信分析差異表達的miRNA及其調控靶點，並經過雙螢光素酶進行驗證。最後，通過裸鼠體內的成瘤和轉移實驗，驗證了GPC5-CTDSP1-miR-26b信號軸對肺癌細胞作用。 研究結果： 本項目中，我們首次發現GPC5過表達組的肺癌細胞分泌的外泌體顯著抑制淋巴管內皮細胞的成管和遷移。通過miRNA-Seq對比分析正常組和GPC5過表達組肺癌細胞分泌的外泌體中miRNAs的含量差異，結果發現miR-26b富集於GPC5過表達組肺癌細胞分泌的外泌體中。在進一步的機制研究中，我們發現GPC5可以轉錄水平激活miR-26b的宿主基因CTDSP1的表達，並且此激活方式依賴於ARH-ARNT信號通路。與此同時，GPC5轉錄激活的CTDSP1基因，顯著抑制肺癌細胞本身的增殖水平。外泌體中含有的miR-26b通過靶向結合於PTK2基因的3’UTR區域，抑制PTK2基因的表達，進而抑制淋巴管內皮細胞的成管和遷移能力。 研究意義： 本研究揭示了GPC5-CTDSP1-miR-26b-PTK2信號通路在肺癌細胞淋巴管轉移中的關鍵抑癌作用。此發現將為肺癌的靶向治療提供新的思路和策略。