《GLI3基因p.M111T突變致食管閉鎖發生的分子機制研究》是依託復旦大學，由沈淳擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：GLI3基因p.M111T突變致食管閉鎖發生的分子機制研究
- 依託單位：復旦大學
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：沈淳
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
食管閉鎖（EA）是新生兒期最常見的先天性食管發育畸形。胚胎期食管發育分化異常是EA發生的重要原因，機制不明。GLI3基因是Hedgehog信號通路上的關鍵抑制性轉錄因子，與食管正常發育分化密切相關，動物實驗已發現GLI3基因變異可導致食管發育分化異常。申請人前期研究首次在EA患兒中檢測出GLI3基因點突變，並發現c.332T＞C（p.M111T）新突變位點。本項目擬建立GLI3基因M111T突變體重組真核細胞表達載體，運用螢光素酶報告系統，免疫螢光，染色質免疫沉澱法及組蛋白去乙醯化酶活性實驗等檢測分析M111T突變對GLI3轉錄抑制功能的影響；套用凝膠遷移實驗，螢光定量PCR，免疫印跡，細胞增殖及凋亡實驗等觀察M111T突變對GLI3下游靶基因功能的影響。初步揭示GLI3基因突變對食管發育分化的影響及分子機制，進一步闡明EA發生的分子遺傳機制，為EA遺傳諮詢，產前篩查及早期預防提供依據。
結題摘要
食管閉鎖（EA）是新生兒期最常見的先天性食管發育畸形。胚胎期食管發育分化異常是EA發生的重要原因，機制不明。GLI3基因是Hedgehog信號通路上的關鍵抑制性轉錄因子，與食管正常發育分化密切相關。申請人前期研究首次在EA患兒中檢測出GLI3基因點突變，並發現c.332T＞C（p.M111T）新突變位點。在本研究中成功構建並鑑定GLI3基因野生型及M111T 突變型重組真核細胞表達載體，進一步運用螢光素酶報告系統，免疫螢光，免疫共沉澱等實驗方法發現M111T突變通過干擾GLI3與SKI蛋白的結合，GLI3蛋白在亞細胞定位，GLI3報告基因的促轉錄活性等方式來影響GLI3的正常生理功能。本項目初步揭示GLI3基因突變對食管發育分化的影響及分子機制，進一步闡明EA發生的分子遺傳機制，為EA遺傳諮詢，產前篩查及早期預防提供依據。
