《FoxO3a在PC9細胞中對吉非替尼耐藥性的調控機制研究》是依託鄭州大學，由溫強擔任項目負責人的聯合基金項目。
基本介紹
- 中文名：FoxO3a在PC9細胞中對吉非替尼耐藥性的調控機制研究
- 項目類別：聯合基金項目
- 項目負責人：溫強
- 依託單位：鄭州大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
表皮生長因子受體(EGFR)酪氨酸激酶抑制劑——吉非替尼的獲得性耐藥是導致其用於非小細胞肺癌(NSCLC)治療失敗的主要原因。PI3K/Akt通路是EGFR信號的重要傳導途徑。FoxO3a作為Akt的直接下游靶標參與了多種腫瘤耐藥性機制，但其在NSCLC耐藥中的作用至今未有報導。我們發現，高表達FoxO3a可以逆轉吉非替尼耐藥細胞株PC9細胞的耐藥性。那么FoxO3a通過何種機制逆轉了吉非替尼的耐藥性？本課題通過信號阻斷劑、過表達、基因敲除和導入定點突變的質粒等多種手段，在PC9耐藥細胞株中檢測相關信號分子的表達和磷酸化的改變，研究FoxO3a的核轉位動力學變化和對EGFR信號通路的負反饋作用，尋找參與耐藥機制的下游靶基因，以期明確FoxO3a在調控NSCLC對吉非替尼耐藥性中的作用和機制。
結題摘要
表皮生長因子受體(EGFR)酪氨酸激酶抑制劑——吉非替尼的獲得性耐藥是導致其用於非小細胞肺癌(NSCLC)治療失敗的主要原因。FoxO3a作為Akt 的直接下游靶標參與了多種腫瘤耐藥性機制。我們前期發現，高表達FoxO3a可以逆轉吉非替尼耐藥細胞株PC9細胞的耐藥性。本課題通過信號阻斷劑、過表達、基因敲除和導入質粒等多種手段，在PC9細胞株中檢測相關信號分子的表達水平的改變。結果發現，PC9細胞和PC9/GR細胞正常培養狀態時，FoxO3a-GFP均分布於細胞質中；剝奪血清可使FoxO3a-GFP濃集於細胞核中；EGF可使FoxO3a-GFP逐漸重新回到胞質中。通過對基因表達程度的調節，FoxO3a過表達和EPS8沉默後，PC9細胞的增殖指數PI從原來的47.31%分別下降到24.76%和37.56%； FoxO3a沉默和EPS8過表達時，PC9細胞的增殖指數PI較原來的47.31%分別上升至56.4%和57.71%。據此我們進證實FoxO3a能夠抑制腫瘤細胞的增殖而EPS8能促進細胞增殖。同時在荷瘤小鼠的在體實驗中，我們發現FoxO3a siRNA組及高表達EPS8組荷瘤小鼠腫瘤體積及腫瘤重量顯著增加；高表達FoxO3a組及EPS8 siRNA組的腫瘤體積和重量卻顯著減小。說明EPS8具有顯著的促腫瘤生長的作用，而FoxO3a可以顯著抑制腫瘤的生長。進而，我們研究了FoxO3a對EPS8的調控作用。EPS8在FoxO3a過表達時反而其mRNA含量較NC組降低1倍。說明FoxO3a很可能通過直接或間接的作用於EPS8而抑制其基因的表達。 通過上述研究我們基本可以確定在PC9細胞中FoxO3a通過直接或間接的抑制EPS8表達對PC9細胞的耐藥起到抵抗作用。FoxO3a-EPS8通路可能在調控NSCLC對吉非替尼耐藥性中的起到關鍵作用，並具有成為治療靶點的潛力。
