《FasL在椎間盤免疫赦免缺失調控中作用的實驗研究》是依託中國人民解放軍第四軍醫大學，由羅卓荊擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：FasL在椎間盤免疫赦免缺失調控中作用的實驗研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：羅卓荊
- 依託單位：中國人民解放軍第四軍醫大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
椎間盤退變是困擾廣大患者的一種常見病，其發病機理與椎間盤組織的免疫赦免狀態被打破有關，具體分子機制尚不清楚。FasL-Fas相互作用參與機體免疫赦免的形成及維持。FasL表達於人椎間盤髓核細胞，可能與椎間盤退變相關。本研究擬在前期研究的基礎上，藉由人椎間盤髓核細胞和免疫細胞體外共培養的細胞模型，通過RNAi及腺病毒感染的方法，下調或上調FasL表達，觀察髓核細胞，巨噬細胞，T淋巴細胞表形的變化，檢測髓核細胞外基質的變化，闡明FasL在髓核細胞與免疫細胞相互作用過程中的關鍵地位；在此基礎上，研究Caspase、Bcl體系在介導FasL對髓核浸潤免疫細胞殺傷效應的意義，探討FasL參與維持椎間盤髓核免疫赦免的分子機制；構建FasL腺病毒載體，感染椎間盤退變兔髓核細胞，以影像學及形態學指標檢測兔椎間盤退變程度，初步嘗試基於FasL的基因治療策略，為椎間盤退變的治療提供一種新思路和理論依據。
結題摘要
椎間盤退變是骨科常見疾病，是一系列脊柱退行性疾病的病理基礎。椎間盤髓核被軟骨終板以及纖維環所包繞，無血管，不與機體的免疫系統接觸，其中心髓核含有多種自體抗原，是一個免疫赦免器官。當其免疫赦免破壞時，會造成自體免疫反應，引起或加重椎間盤退變。近年來，醫學界逐步重視研究椎間盤髓核免疫赦免狀態與椎間盤退變的關係。FasL作為體內維持免疫系統平衡的關鍵分子，其與Fas的結合可導致免疫細胞凋亡。本研究主要圍繞可能參與髓核細胞與免疫細胞相互作用的關鍵分子FasL-Fas，探討椎間盤免疫赦免缺失的分子機制。本研究首先明確了FasL在人椎間盤髓核細胞的表達，結果發現，退變髓核細胞的FasL表達量較正常髓核細胞有顯著降低。在通過慢病毒轉染上調退變髓核細胞的FasL表達後，通過人髓核細胞和人外周血免疫細胞的共培養發現，髓核細胞所表達的FasL 可顯著增加免疫細胞（巨噬細胞和CD8+T細胞）凋亡。同時，我們也建立了髓核細胞與血管內皮細胞的共培養模型，並發現髓核細胞表達的FasL可明顯誘導血管內皮細胞的凋亡，提示FasL在維持椎間盤無血管狀態，阻斷免疫細胞的浸潤途徑發揮重要作用，進一步闡明了FasL在椎間盤免疫赦免中的重要作。此外，我們發現，可溶性的FasL在髓核細胞培養液中有陽性表達，並首次發現可溶性FasL在退變椎間盤髓核細胞中表達降低，而可溶性Fas在退變椎間盤髓核細胞中表達升高。最後，我們通過建立纖維環穿刺法誘導椎間盤退變的動物模型，通過病毒轉染上調其髓核FasL表達，發現FasL可通過重建椎間盤免疫赦免平衡，減輕退變椎間盤自體免疫反應，並減緩椎間盤退變進程。在以上研究基礎上，我們進行了椎間盤退變在免疫調節治療的探討和總結，並發表相關的醫學構想和綜述。另外，我們也在實驗中對椎間盤退變研究得到了其他新成果，發現細胞骨架蛋白成分人角蛋白8（CK8）在退變髓核細胞中隨退變表達降低，同時，首次發現壓力培養所導致的CK8磷酸化是其表達降低的重要原因。另外，建立了脂肪幹細胞和髓核細胞的共培養體系，首次發現二者接觸性共培養後，脂肪幹細胞可向髓核細胞特異性分化，並且可保護髓核細胞在高壓培養下的退變。以上的結果顯示，FasL在椎間盤免疫赦免維持中發揮了重要作用，為將來椎間盤退變在免疫學治療中提供了新的研究思路。
