《FTY720干預免疫介導的急性肺損傷/肺纖維化的機制研究》是依託上海交通大學，由葉霜擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：FTY720干預免疫介導的急性肺損傷/肺纖維化的機制研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：葉霜
- 依託單位：上海交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
臨床無肌炎的皮肌炎（clinically amyopathic dermatomyositis，CADM）是具備皮肌炎特徵性皮疹但是無肌炎或肌炎輕微，而以急性肺損傷/瀰漫性肺纖維化、進行性呼吸衰竭為突出表現的臨床綜合徵，目前其發病機理不明、死亡率極高、治療乏術。本研究在前期工作的基礎上，試圖觀察新型免疫抑制劑S1P受體激動劑Fty720對CADM肺損傷動物模型的治療效應，並進一步探討其對免疫介導的肺損傷／肺纖維化可能的保護作用機制。試圖通過一系列實驗明確該機制是否是通過由溶血磷脂酸（LPA）受體向S1P受體活化偏移、減少成纖維細胞募集、抑制免疫效應細胞移行、增強肺血管內皮屏障功能等環節協同實現。本研究可能為CADM合併急性肺損傷／肺纖維化這一疑難危重症提供改善病情藥物，其結果亦可能拓展套用於其他的免疫／或非免疫介導的肺損傷／肺纖維化，具有重要的臨床意義。
結題摘要
目的：利用博萊黴素誘導的肺纖維化小鼠動物模型和體外培養的人肺成纖維細胞評價新型免疫抑制劑FTY720對肺纖維化的影響，探討了FTY720對肺間質炎症、組織損傷和纖維化的影響和可能的作用機制。 方法：套用單次氣管內注入博萊黴素的方法建立C57小鼠肺纖維化模型，並通過灌胃給藥FTY720 (0.1mg/kg/d)來實現對小鼠肺纖維化的干預，分別於第7，14，21天處死小鼠；對小鼠肺組織進行HE 染色及Masson 染色, 觀察各組肺組織病理變化並評估炎症和肺纖維化程度; 免疫組化法動態觀察肺組織中TGF-β, α-SMA 的表達；通過Real-time PCR法測定肺組織中細胞因子VEGF, IL-1β, α-SMA , Col1a1mRNA的表達水平，評價FTY720在體內的抗纖維化效應；體外用脂多糖刺激人肺成纖維細胞（HFL1），利用Xcelligence實時監測系統觀察FTY720對HFL1細胞增殖的影響；Real-time PCR法檢測細胞中TGF-β, IL-6, IL-8, MMP2, TIMP1, VEGF, α-SMA mRNA的表達水平，酶聯免疫吸附法（ELISA）測定細胞上清中纖維連結蛋白（FN）的分泌水平，評價FTY720在體外的抗纖維化效應；利用Transwell趨化實驗檢測FTY720對溶血磷脂酸（LPA）介導的人肺成纖維細胞趨化的影響。結果：HE 染色及Masson 染色顯示FTY720干預後小鼠肺纖維化程度較模型組減輕；免疫組化結果肺組織TGF-β、α-SMA陽性表達顆粒較模型組減少； FTY720干預後VEGF, IL-1β，α-SMA ,Col1a1在mRNA水平上表達較模型組下調，且均具統計學意義；體外研究發現FTY720干預後HFL1的增殖和趨化活性下降，細胞上清中分泌的FN蛋白水平降低，TGF-β mRNA表達水平下調, 且具有濃度依賴性，IL-6, IL-8, MMP2, α-SMA mRNA水平也下調，具有統計學意義。結論：1. FTY720對博萊黴素誘導小鼠肺纖維化具有保護作用，可明顯降低肺泡炎、肺泡破壞程度及纖維化程度；2. FTY720的保護作用主要是通過抑制TGF-β, α-SMA, VEGF, IL-1β等纖維化相關因子表達，抑制成纖維細胞增殖和趨化以及細胞外基質沉積而減緩肺纖維化的進程。
