《FGFR4/CMC-HPLC/MS篩選白芥子促腫瘤細胞凋亡活性成分研究》是依託西安交通大學，由張濤擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：FGFR4/CMC-HPLC/MS篩選白芥子促腫瘤細胞凋亡活性成分研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：張濤
- 依託單位：西安交通大學
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
利用以受體靶標為核心的藥物直接篩選技術，從藥用植物中尋找高效、低毒抗腫瘤活性成分是藥物研究的熱點內容之一。抑制酪氨酸激酶受體家族成員FGFR4在癌細胞中的表達可促進腫瘤細胞凋亡，提高腫瘤細胞藥物敏感性。本項目在前期工作的基礎上，利用細胞生物學、色譜科學、藥物分析等技術，以FGFR4為研究對象，構建HEK293-FGFR4高表達細胞系，建立高表達FGFR4/CMC-HPLC/MS篩選模型，篩選、鑑定中藥白芥子中可與FGFR4相互作用的活性成分；通過MTT、cell cycle、apoptosis analysis、放射性標記化合物標記分析、QT-PCR、western blot等方法，分析活性成分促腫瘤細胞凋亡的作用及分子機制，並驗證其抗腫瘤活性。本項目不僅為闡明FGFR4作為抗腫瘤增敏藥物篩選靶標提供實驗依據，同時為篩選抗腫瘤天然活性成分提供新的研究模型，為抗腫瘤藥物篩選開拓思路。
結題摘要
本項目利用FGFR4受體靶標為研究對象，建立細胞膜色譜的藥物直接篩選技術，從藥用植物中尋找高效、低毒抗腫瘤活性成分是藥物研究的熱點內容之一。抑制酪氨酸激酶受體家族成員FGFR4在腫瘤細胞中的表達可促進腫瘤細胞凋亡，提高腫瘤細胞對化療藥物敏感性。 1. 以FGFR4為研究對象，構建HEK293-FGFR4 高表達細胞株，並以此建立高表達FGFR4/CMC模型，從白芥子提取物中篩選活性組分，通過搭建的線上二維聯用HPLC/MS 篩選系統，從白芥子中篩選、鑑定可與FGFR4 相互作用的活性成分為芥子鹼，並初步驗證其對HEK293-FGFR4細胞株活性，發現芥子鹼可有效抑制HEK293-FGFR4 細胞增殖。 2. 課題按照計畫要求開展藥物增敏研究，芥子鹼單獨給藥表現出較低的細胞毒性，對Caco-2細胞殺傷性小，而多柔比星給藥同樣表現出較低細胞毒，將芥子鹼聯合多柔比星給藥，發現Caco-2細胞凋亡率增加，高於芥子鹼和多柔比星單獨給藥後的凋亡率，因此，認為芥子鹼逆轉Caco-2細胞耐藥活性，增加化療藥物多柔比星促細胞凋亡率。通過流式細胞術研究發現，芥子鹼可以提高多柔比星胞內濃度，具有增敏效果。通過免疫印跡分析發現，芥子鹼造成p-gp蛋白表達量降低，但對g-pg基因轉錄水平影響不大，因此，推測芥子鹼在轉錄後水平調控p-gp蛋白表達。 3. FGFR4存在突變型Y365C-FGFR4，該突變型導致FGFR4持續磷酸化。通過點突變實驗，對FGFR4編碼區365進行突變，構建Y367C-FGFR4-pEGFP-N1，轉染、穩定篩選得到Y365C-FGFR4高表達細胞，發現Y365C-FGFR4高表達細胞增殖性較陰性細胞強。 4. 建立Y367C-FGFR4細胞膜色譜模型，進行CMC-HPLC/MS線上分析系統篩選，發現川芎提取物中的活性成分為歐當歸內酯A，MTT發現歐當歸內酯A可以抑制乳腺癌MDA-MB-453細胞增殖，降低FGFR4介導的通路磷酸化，具有逆轉抗腫瘤藥物敏感性。 本項目不僅為闡明FGFR4 作為抗腫瘤增敏藥物篩選靶標提供實驗依據，同時為篩選抗腫瘤天然活性成分提供新的研究模型，為抗腫瘤藥物篩選開拓思路。
