《FAT/CD36介導的日本沼蝦脂肪酸代謝分子機理研究》是依託湖州師範學院，由丁志麗擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：FAT/CD36介導的日本沼蝦脂肪酸代謝分子機理研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：丁志麗
- 依託單位：湖州師範學院
項目摘要,結題摘要,
項目摘要
針對日本沼蝦養殖業中出現的生長緩慢、規格偏小、提前抱卵等一系列問題，在前期證實飼料中脂肪（酸）對其生長發育及胞內脂肪酸代謝基因表達起重要調節作用的基礎上，擬進一步從脂肪酸跨膜轉運的重要載體蛋白—脂肪酸轉位酶（FAT/CD36）入手，從體內外的角度深入探索FAT/CD36基因在日本沼蝦脂肪酸代謝中分子作用機理。克隆日本沼蝦FAT/CD36 cDNA全長，分析基因組織表達特性；培養日本沼蝦肝胰腺細胞，分析脂肪酸種類對FAT/CD36表達的調節作用，觀測其與脂肪酸代謝相關因子動態關係；使用不同脂肪酸配製精製飼料進行日本沼蝦室內養殖試驗，比較分析脂肪酸對FAT/CD36表達水平及相關代謝因子的影響；選取養殖結束後部分蝦體注射dsRNA （雙鏈RNA），沉默FAT/CD36，分析脂質代謝因子及組織脂肪酸組成比例的變化。研究結果將豐富甲殼動物脂類代謝及調控機理的研究資料，並指導經濟蝦類配合飼料生產。
結題摘要
日本沼蝦為我國重要的淡水經濟養殖種類之一,近年來在實際生產中出現了個體生長緩慢、規格偏小等一系列問題，制約著該蝦養殖業進一步發展。本研究擬從脂肪酸跨膜轉運的重要載體蛋白—脂肪酸轉位酶（FAT/CD36）入手，從體內外的角度深入探索FAT/CD36基因在日本沼蝦脂肪酸代謝中分子作用機理。結果如下：（1）通過轉錄組測序（GSE78788），發現一含CD36結構域基因，起初命名為FAT/CD36，後經比對及進化樹發現其與日本對蝦的SR-BI基因更為接近，同時文庫種未發現其它具CD36結構域的基因，因此將其命名為MnSR-BI。SR-BI是B類Ⅰ型清道夫受體，屬於CD36清道夫受體家族中的一種跨膜蛋白，在脂質穩態調節方面起著很重要的作用，因此猜測MnSR-BI可能具有了包括FAT/CD36基因功能的多種功能。MnSR-BI基因完整編碼區長為1545 bp，其蛋白含一個CD36結構域，N-端和C-端分別含有一個跨膜區。MnSR-BI胺基酸序列與其它物種CD36清道夫受體家族成員相似性約34-41%。MnSR-BI在肝胰腺組織中高表達。（2）飼料脂肪源如亞麻籽油和豆油促進肝胰腺MnSR-BI基因表達，dsRNA干擾抑制了肝胰腺中MnSR-BI基因的表達，同時引起了脂質代謝相關基因（CPT1, ACC, FABP10和ACBP）的表達變化。但亞麻籽油和豆油對蝦體的生長促進作用不顯著。（3）飼料中0.86%花生四烯酸（ARA）促進了日本沼蝦的生長，0.28%ARA顯著上調MnSR-BI基因的表達，0.28-0.54%ARA顯著提高脂肪酸轉運相關基因（FATP4和FABP10）的mRNA表達。（4）1.66-2.02%飼料亞麻酸（LNA）顯著提高MnSR-BI基因的表達，同時乙醯輔酶A羧化酶、△9去飽和酶和脂肪酸延長酶6表達量也隨飼料中LNA含量的升高呈降低趨勢。（5）在體外，使用不同濃度ARA孵化日本沼蝦原代肝胰腺細胞，過高的ARA濃度（1 000 μmol/L）會降低細胞的活力，適宜的ARA濃度（50-100 μmol/L）可促進脂肪酸脫飽和酶、碳鏈延長酶及脂肪酸轉運相關基因（MnSR-BI, FABP10和ACBP）的mRNA表達。本研究首次分析日本沼蝦具有CD36結構域的SR-BI基因，並分析體內外脂肪酸脂肪酸營養對其表達的影響，結果可為甲殼動物SR-BI基因的研究提供參考。
