核酸外切酶 III (E.coli)
概述：該酶作用於雙鏈DNA，沿3'→5'方向逐步催化去除單核苷酸(1)。每次酶與底物結合催化，只有幾個核苷酸被除掉，從而在DNA分子群內產生漸進缺失(2)。
儘管可以作用於雙鏈DNA的切刻產生單鏈gap，但最適底物是平末端或3'凹陷末端DNA。由於對單鏈DNA無活性，因此3'突出末端抗該酶的切割，拮抗程度隨3'突出末端的長度而不同，四鹼基或更長的突出完全不能被切割。這種特性對於一端是抗性位點（3'突出端）一端是敏感位點（平端或5'突出端）的線性DNA分子，可以產生單向缺失(3)。
核酸外切酶III的活力部分依賴螺旋結構(4)並根據序列的不同而有差異(C>A=T>G; 文獻5)。溫度、鹽濃度和酶與DNA的比例對酶活力影響很大，應根據不同的反應調整反應條件。
據報導，核酸外切酶III也有RNase H、3'磷酸酶和脫嘌呤/嘧啶-核酸內切酶活性。
套用：
單向巢式缺失
定點突變
鏈特異性探針的製備
雙脫氧測序用單鏈底物的製備
