Elmo1-Nck 的相互作用在肝細胞癌侵襲和轉移中的作用研究

《Elmo1-Nck 的相互作用在肝細胞癌侵襲和轉移中的作用研究》是依託中山大學，由彭寶崗擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：Elmo1-Nck 的相互作用在肝細胞癌侵襲和轉移中的作用研究
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：彭寶崗
• 依託單位：中山大學

中文摘要

銜接蛋白Nck通過調節細胞骨架蛋白的成核作用，對細胞的形態和運動具有重要作用。申請者在前期工作中發現了一個新的Nck相互作用蛋白- - -Elmo1，且Elmo1在肝細胞癌（HCC）組織中的表達顯著高於正常肝組織，在高轉移肝癌細胞系中的表達也高於低轉移和無轉移能力的細胞：提示Elmo1可能通過與Nck 的相互作用引起細胞骨架改變，促進腫瘤細胞的遷移。由於我們發現Elmo1結合於Nck的SH2結構域(酪氨酸磷酸化殘基的結合區域)，本研究擬採用免疫共沉澱和GST-pulldown實驗進一步驗證Elmo1與Nck的相互作用，明確其相互作用是否依賴於Elmo1的磷酸化，並確定作用位點。最後，通過細胞和動物實驗檢測Elmo1 的表達變化對細胞遷移和腫瘤侵襲的影響，闡明Elmo1-Nck-WASP-Arp2/3這一新途徑在調控細胞骨架系統，促進細胞運動中的作用，進一步揭示HCC侵襲、轉移的分子機制。

結題摘要

銜接蛋白Nck1對細胞的形態和運動具有重要作用。我們前期工作中發現Nck1相互作用蛋白Elmo1可能通過與Nck1的相互作用引起細胞骨架改變，促進肝癌細胞的遷移。本研究中，我們構建了組織晶片，對263對肝癌及癌旁組織進行免疫組化檢測，發現Elmo1在肝癌組織中表達顯著高於癌旁組織，Elmo1高表達的肝癌患者其1、3、5年總生存率和無瘤生存期均顯著低於Elmo1低表達患者，Elmo1是肝癌患者預後不良的獨立因素。繼而我們在肝癌組織和肝癌細胞株SK-Hep-1中證實了肝癌體內、體外均存在有Elmo1和Nck1的相互作用。此外，我們採用免疫共沉澱方法證實肝癌組織較癌旁組織中的Elmo1酪氨酸磷酸化現象更為明顯。繼而對Elmo1質粒的Y18、Y216、Y395 三個磷酸化位點分別進行點突變，之後將上述質粒分別轉染肝癌細胞SK-HEP-1，然後採用GST-Pulldown和免疫印跡對細胞中Elmo1和Nck1的相互作用進行驗證，結果提示，上述3個位點對於兩者的相互作用來講都是必須的，突變後作用明顯減弱。通過調控Elmo1表達發現，Elmo1能夠通過激活Rac1調控肝癌細胞遷移能力；而Elmo1的酪氨酸磷酸化位點如果發生突變則上述功能缺失。此外，我們還證實了Nck1的SH2結構域的完整性對於Elmo1和Nck1相互作用至關重要，也直接影響到Elmo1誘導的Rac1活性增強和細胞遷移能力增強。再者，肝癌組織晶片免疫組化染色結果提示，Elmo1和上皮間質轉化（EMT）標記物E-Cadherin和Vimentin及自噬相關標記物Beclin I和p62具有顯著的相關性；細胞實驗則提示Elmo1能夠誘導肝癌細胞發生上皮間質轉化，自噬細胞實驗仍在進行中。此外，我們已經構建了Elmo1過表達和下調錶達的慢病毒載體並獲得了穩定表達的肝癌細胞株，正在對上述細胞株進行自噬和EMT晶片檢測篩選關鍵通路蛋白，希望能夠對其機制進行深入研究。總之，我們的研究結果顯示，Elmo1促進了肝癌細胞的侵襲和轉移，Elmo1是肝癌患者肝切除術後預後不良的獨立因素，有可能成為肝癌基因治療的潛在作用靶點。