《EZC-乳腺癌幹細胞轉基因小鼠模型的建立及其套用》是依託中山大學，由謝小明擔任項目負責人的重點項目。
基本介紹
- 中文名：EZC-乳腺癌幹細胞轉基因小鼠模型的建立及其套用
- 項目類別：重點項目
- 項目負責人：謝小明
- 依託單位：中山大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
乳腺癌幹細胞（BCSC）與乳腺癌發生、發展、轉移、復發和耐藥等關係密切。BCSC分離純化和檢測困難，自我更新和分化易受環境因素影響，其研究結果差異較大。因此，建立快速分離純化和檢測乳腺癌幹細胞，受環境因素干擾少，能為高通量篩選藥物提供良好平台的動物模型是迫切的。本項目擬套用申請者研究的BCSC特異性啟動子（X）和VISA整合放大系統（美國專利），建立X-VISA-Luc-GFP轉基因小鼠模型，再與MMTV-Wnt-1乳腺癌轉基因小鼠雜交後，獲得X-VISA-Luc-GFP BCSC模型（EZC-BCSC轉基因小鼠模型）。該模型的BCSC特異性表達Luc (螢光素酶) 和GFP（綠色螢光蛋白），可用活體成像系統實時檢測BCSC，也可用螢光顯微鏡和流式細胞儀快速分離純化和檢測BCSC。本模型將為研究BCSC與乳腺癌發生、發展、轉移復發及耐藥關係和高通量活體內篩選BCSC靶向藥物提供實用的平台。
結題摘要
乳腺癌幹細胞（BCSCs）與乳腺癌發生、發展、轉移、復發和耐藥等關係密切。BCSCs 分離純化和檢測困難，自我更新和分化易受環境因素影響，其研究結果差異較大。因此，建立快速分離純化和檢測乳腺癌幹細胞，受環境因素干擾少，能為高通量篩選藥物提供良好平台的動物模型是迫切的。本研究：（1）套用乳腺癌幹細胞特異性啟動子建立含32個乳腺癌幹細胞特異性啟動子的啟動子庫；（2）篩選出5 高效高特異性的乳腺癌幹細胞靶向系統（EZH2-VISA，MMP2-VISA，LGR5-VISA，hTERT-VISA，ALDH1-VISA）， X-VISA 可達到CMV 啟動子活性的50%-300%，但在人正常細胞和乳腺正常細胞中無明顯活性；（3）該研究獲得4個X-VISA-Luc-GFP 乳腺癌幹細胞活體動物體內光學成像轉基因小鼠模型( MMP2-VISA-Luc-GFP, LGR5-VISA-Luc-GFP, hTERT-VISA-Luc-GFP, ALDH1-VISA-Luc-GFP )，並分別與MMTV-Wnt-1 乳腺癌轉基因小鼠雜交後，獲得X-VISA-Luc-GFP BCSCs模型（EZC-BCSCs 轉基因小鼠模型）。該模型的乳腺癌幹細胞特異性表達Luc (螢光素酶) 和GFP（綠色螢光蛋白），可用螢光顯微鏡和流式細胞儀快速分離純化和檢測乳腺癌幹細胞，該研究從EZC-BCSCs 轉基因小鼠模型（TVSA-Wnt1陽性小鼠）腫瘤中分離一株乳腺癌幹細胞並命名為XM001。（4）獲得1個殺滅乳腺癌幹細胞的靶向分子（hTERT-VISA-miR-34a）2個殺滅乳腺癌細胞的靶向分子（hTERT-VISA-PEA15 和 hTERT-VISA-miR-200b/c），其中hTERT-VISA-miR-34a通過體內外實驗證實可抑制乳腺癌細胞的生長與侵襲，進一步發現hTERT-VISA-miR-34a可抑制乳腺癌幹細胞的成球能力，下調乳腺癌幹細胞標誌物CD44的表達，誘導乳腺癌幹細胞凋亡。通過靶向抑制CD44與Wnt1進而抑制Wnt-β-catenin 信號通路，從而抑制乳腺癌幹細胞的生長侵襲。該項目對於闡明乳腺癌發生髮展的分子機制提供了堅實的理論基礎和實驗依據，EZC 轉基因小鼠模型為研究乳腺癌幹細胞與乳腺癌發生、發展、轉移復發及耐藥關係和高通量活體內篩選乳腺癌幹細胞靶向藥物提供實用的平台。
