EVC2基因突變引起Weyers顱面骨發育不全的機制研究

《EVC2基因突變引起Weyers顱面骨發育不全的機制研究》是依託華中科技大學，由石立松擔任項目負責人的青年科學基金項目。

基本介紹

• 中文名：EVC2基因突變引起Weyers顱面骨發育不全的機制研究
• 項目類別：青年科學基金項目
• 項目負責人：石立松
• 依託單位：華中科技大學

中文摘要

EVC2基因位於染色體4p16，編碼1308個胺基酸功能未知的Limbin蛋白，該基因突變能引起兩種表型類似的遺傳病：Weyers顱面骨發育不全（Weyers Arcrofacial Dysostosis, WAD）以及埃利偉氏綜合徵（Ellis-van Creveld Syndrome，EvC），這兩種疾病均以肢端骨骼以及顱頜面部發育異常為主要臨床表現，最主要的區別在於遺傳模式上WAD為顯性而EvC為隱性。前期工作中，我們發現了能夠導致WAD的EVC2基因c.3793delC突變,本課題擬在此基礎上研究：EVC2突變與疾病關係、Limbin蛋白亞細胞定位、Limbin蛋白相互作用蛋白以及EVC2基因潛在上下游基因，以此來闡明EVC2基因突變導致WAD機制，探索EVC2基因的基本生物學功能，揭示其參與的細胞信號通路，為深入了解肢體骨骼以及顱頜面部發育過程的重要調控機制奠定堅實的理論基礎。

結題摘要

本課題收集了一個印度常染色體顯性WAD綜合徵家系以及一個湖北地區常染色體隱性EvC綜合徵家系。對印度WAD家系的測序未在EVC以及EVC2基因外顯子和調控區發現任何致病突變改變，基因組定量分析也沒有發現兩個基因的拷貝數變化，表明EVC或者EVC2基因突變可能不是造成該家系表型的原因。課題組對湖北EvC綜合徵家系測序發現先征者攜帶了兩個新的EVC基因剪接改變。通過父母DNA測序確定兩個鹼基改變一個遺傳自父親，一個來自母親。這兩個鹼基改變不存在於任何已知資料庫，篩查488條對照染色體也未發現攜帶者。隨後課題組構建了含有兩個剪接改變位點的野生型以及突變型minigene表達載體，包含了突變涉及外顯子以及上下游外顯子和外顯子周邊序列。Minigen被轉入HeLa細胞表達，總RNA從細胞中提取並進行逆轉錄PCR以觀察該鹼基改變對EVC minigene剪接的影響。結果顯示，兩個剪接位點的改變均產生了異常的剪接體，證明兩個鹼基改變很有可能是致病突變。本課題的發現進一步擴展了EVC/EVC2基因的突變譜，並揭示了EVC基因突變造成轉錄本異常的機制，為了解EvC綜合徵以及WAD綜合徵的分子機制提供了理論基礎，為將來的靶向治療提供了新思路。