《ERG11基因G487T和T916C突變與白念珠菌氟康唑耐藥關係研究》是依託山東大學，由徐永豪擔任項目負責人的青年科學基金項目。
基本介紹
- 中文名：ERG11基因G487T和T916C突變與白念珠菌氟康唑耐藥關係研究
- 項目類別：青年科學基金項目
- 項目負責人：徐永豪
- 依託單位：山東大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
念珠菌耐藥是經常困擾臨床的問題。氟康唑靶酶的構象變化和藥物流出泵的過度表達，是白念珠菌對其耐藥的兩種主要機制。.我們發現靶酶編碼基因ERG11的G487T和T916C突變可能參與菌株耐藥，擬構建帶有G487T和/或T916C突變及無突變的4種基因型白念珠菌株，檢測並比較不同基因型菌株的氟康唑MIC值、靶酶和藥物流出泵的表達水平，綜合分析G487T和T916C與耐藥的關係。.另取敏感白念珠菌人工誘導耐藥後，測定靶酶和藥物流出泵的表達水平並擴增ERG11測序；取誘導耐藥株和含G487T、T916C的臨床耐藥株在無氟康唑培養基上多次傳代後再檢測其MIC值、靶酶和藥物流出泵的表達水平及ERG11序列，與傳代前進行比較。分析藥物選擇壓力對耐藥性狀和ERG11突變的影響，為臨床用藥和耐藥菌株的檢測提供實驗室依據。
結題摘要
白念珠菌對氟康唑耐藥的機制之一是靶酶14α-去甲基酶（Erg11p）因編碼基因ERG11突變導致空間構型變化。我們的研究旨在證明白念珠菌ERG11的兩處突變G487T(A114S)和T916C(Y257H)與氟康唑耐藥之間的關係。實時定量PCR結果顯示，14株帶有G487T和T916C突變的臨床耐藥株CDR1 mRNA轉錄水平提高了1.6-8倍，CDR2 mRNA上調了3.7-52倍，而ERG11、MDR1和FLU1等耐藥基因在不同菌株中的轉錄水平不盡相同。Western雜交結果顯示，這14株耐藥株的Cdr1p表達均低於標準對照株Saccharomyces AD/CDR1，某些菌株的Cdr2p表達高於對照株，而在另一些菌株中則較低甚至檢測不到。這些數據提示外流泵不是這14株耐藥株產生耐藥的關鍵因素。G487T和T916C與氟康唑耐藥的關係值得研究。我們在Saccharomyces cerevisiae INVSc1中過度表達含G487T和/或T916C突變的ERG11，發現過表達T916C的菌株氟康唑MIC為128μg/ml，陰性對照和過表達單一G487T的菌株MIC為32μg/ml，空白對照MIC為8μg/ml。我們將白念珠菌標準株CAI4的ERG11基因一條等位基因構建出T916C突變後，其MIC高出親本一倍。T916C可能與白念珠菌對氟康唑耐藥有關。
