EGF對緊密連線蛋白claudin的功能調控及對皮膚屏障的影響研究

《EGF對緊密連線蛋白claudin的功能調控及對皮膚屏障的影響研究》是依託浙江大學，由方紅擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：EGF對緊密連線蛋白claudin的功能調控及對皮膚屏障的影響研究
• 依託單位：浙江大學
• 項目負責人：方紅
• 項目類別：面上項目

項目摘要

課題組發現經皮水分丟失量（TEWL）在長期紫外線輻射之後增加，且與claudin1的下調相關，證實claudin蛋白在維持皮膚屏障功能中所起的作用。claudin蛋白的調控涉及包括EGF通路在內的一些信號轉導通路，且腫瘤靶向藥物EGFR抑制劑可引發皮膚屏障功能損傷，推測EGF通路可能通過對claudin蛋白的調控，實現對皮膚屏障功能的影響。但調控過程中的具體作用機制和分子網路目前不明，有待闡明。本研究擬通過外源性EGF和EGFR TKIs的添加影響表皮角質形成細胞中的EGF表達，以跨膜電阻和旁細胞滲透量為指標評估細胞屏障功能，並觀察下游ERK途徑中信號蛋白的表達改變，同時以TEWL為觀察指標，在動物實驗中驗證EGF調控claudin蛋白和皮膚屏障功能的作用機制，以進一步闡明EGF調控claudin和皮膚屏障功能的分子機理，為屏障功能障礙性皮膚疾病的的臨床診治提供新的理論和研究依據。

結題摘要

表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑 (epidermal growth factor receptor tyrosine kinases inhibitors，EGFR-TKIs)作為一種分子靶向藥物廣泛地套用於腫瘤的靶向治療。但在臨床套用過程中，觀察到其對皮膚的毒副作用，通常表現皮脂豐富部位丘疹膿皰性損害及皮膚乾燥脫屑，提示可能存在皮膚屏障功能的損傷。為驗證我們的構想，本課題組以表皮生長因子受體（EGFR）為靶點，通過添加外源性EGF和EGFR TKIs影響表皮角質形成細胞中的EGF表達，以跨膜電阻和旁細胞滲透量為指標評估細胞屏障功能，並觀察下游ERK途徑中信號蛋白的表達改變。然後以TEWL為觀察指標，在動物實驗中驗證EGF調控claudin蛋白和皮膚屏障功能的作用機制，以進一步闡明EGF調控claudin和皮膚屏障功能的分子機理。體外細胞實驗研究顯示加入外源性的EGF作用後，HEK細胞EGF-ERK信號通路激活，ERK1，2磷酸化水平增高，claudin1，4蛋白表達增加並被活化，claudin2蛋白表達減少，磷酸化水平降低，細胞電阻增加，旁細胞滲透係數減小；外源性EGFR受體酪氨酸激酶抑制劑Gefitinib作用HEK細胞後，EGF-ERK信號通路被抑制，ERK1，2磷酸化水平降低，claudin1,4蛋白表達減少，磷酸化水平降低，claudin2蛋白表達增加，磷酸化水平升高，並且跨細胞電阻減少，旁細胞滲透係數增加。進一步通過動物實驗證實了外源性EGF/EGFR-TKIs作用於小鼠後，小鼠表皮中EGF-RKF信號通路受到激活或抑制。claudin1，2，4表達的變化與細胞實驗中觀察到的結果一致，通過測量小鼠表皮含水量及經表皮水分丟失量證實小鼠表皮屏障功能受到EGF/EGFR-TKIs的影響。本研究初步闡明了EGF調控claudin和皮膚屏障功能的分子機理，為以屏障功能障礙為特徵的皮膚病的臨床診治提供新的理論和研究依據，為減少靶向抗腫瘤藥物對皮膚的副作用提供了新的防治策略，亦為今後研製更有效且皮膚毒副反應更小的抗腫瘤藥物提供了有用的實驗依據和理論基礎。