Dnd1與Jun 的相互作用及其功能分析

《Dnd1與Jun 的相互作用及其功能分析》是依託湖南師範大學，由彭小寧擔任項目負責人的面上項目。

基本介紹

• 中文名：Dnd1與Jun 的相互作用及其功能分析
• 項目類別：面上項目
• 項目負責人：彭小寧
• 依託單位：湖南師範大學

項目摘要

2005年作者所在的研究小組發現與小鼠睪丸生殖細胞瘤（TGCT）相關的Ter位點中Dnd1基因突變導致TGCT。最近申請人又利用酵母雙雜交系統, 成功篩選到4個與Dnd1相互作用蛋白, 其中之一為Jun蛋白，初步證實了Dnd1和Jun的相互作用；並發現Dnd1 基因在HeLa細胞系中的過表達抑制細胞增殖和誘導細胞周期G1期阻滯。本課題擬在以上研究發現的基礎上利用GST-pull down技術確定Dnd1與c-Jun之間的相互作用區域；用免疫共沉澱等技術證明Dnd1與c-Jun特異性與生理性的結合；用報告基因等技術檢測Dnd1對c-Jun的反式激活功能的影響；用缺失和誘導c-Jun 表達的細胞系統來證明c-Jun是否為Dnd1介導的細胞增殖抑制所必須，並分析Dnd1與c-Jun相互作用與細胞轉化表型的關係。這為明確Dnd1的信號轉導與其致瘤機制建立基礎。

結題摘要

申請人所在研究小組前期發現Dnd1突變導致了小鼠TGCT，Jun蛋白是申請人利用酵母雙雜交系統篩選的四個與小鼠Dnd1相互作用的蛋白之一。在此基礎上，申請人研究團隊利用GST pull-down實驗驗證了Dnd1與Jun蛋白的相互作用，經Co-Ip及雷射共聚焦顯微鏡檢測證實在GC-1細胞內這兩種蛋白的存在特異性和生理性的結合。在GC-1細胞內，雙螢光素酶報告基因技術檢測到Dnd1與Jun蛋白結合後促進AP-1報告基因反式激活。成功構建Dnd1穩定高表達的GC-1細胞系後，經CCK-8實驗及流式細胞學檢測發現高表達的Dnd1對促進GC-1細胞的增殖，抑制GC-1細胞凋亡, 這與預實驗瞬間轉染的結果不同，顯然穩定細胞繫結果更為可靠。與此同時，運用RNA結合蛋白免疫沉澱技術（RIP）結合基因晶片檢測發現Dnd1的靶標mRNA及共同參與的信號傳遞通路，免疫組化染色晶片檢測發現Dnd1在人睪丸及多種腫瘤表達增高;我們還用我們建立的酵母栓雜交系統篩選了人Dnd1，初步發現了與人Dnd1相互作用的四個新基因。總之，Dnd1具有重要的生物學功能，調節細胞增殖及細胞周期等，Dnd1與蛋白及相關mRNA結合可能參與與多種腫瘤的發生和發展，詳細的作用機制及信號傳導通路還有待進一步研究。