《DOT1L及其介導的H3K79甲基化在乳腺癌轉移中的作用及機理研究》是依託天津醫科大學，由宣成昊擔任項目負責人的面上項目。
基本介紹
- 中文名：DOT1L及其介導的H3K79甲基化在乳腺癌轉移中的作用及機理研究
- 項目類別：面上項目
- 項目負責人：宣成昊
- 依託單位：天津醫科大學
中文摘要,結題摘要,
中文摘要
DOT1L是近年來發現的細胞內唯一的H3K79甲基化酶，儘管已經有報導指出DO1L所介導的H3K79的甲基化與基因的轉錄活化相關，其中的機制以及細胞生物學功能研究還遠未深入。我們前期的工作發現DOT1L對乳腺癌的EMT具有促進作用。我們的研究將通過尋找細胞內與DOT1L相互作用的轉錄因子和其它協同因子，以及DOT1L在細胞內的靶基因，探討DOT1L及其介導的H3K79的甲基化與乳腺癌轉移之間的關係及其中的分子機制。另外，探究細胞重編程的過程中表觀遺傳修飾的變化是表觀遺傳學研究最重要的一部分內容。在乳腺癌上皮細胞轉化為間質細胞過程中，負責維持細胞特性的主要轉錄因子的轉變，以及DOT1L及H3K79甲基化修飾在全基因組水平上的分布變化和其中分子機制也將是我們研究的關鍵問題。我們的研究將為認識腫瘤轉移的分子機制提供理論基礎，為尋找遏制腫瘤轉移的藥物提供可能的靶點。
結題摘要
DOT1L是近年來發現的細胞內唯一的H3K79甲基化酶，儘管已經有報導指出DOT1L所介導的H3K79的甲基化與基因的轉錄活化相關，其中的機制以及它的細胞生物學功能研究還遠未深入。我們的研究工作發現DOT1L對乳腺癌的EMT具有促進作用。我們的研究表明DOT1L在轉移性乳腺癌細胞中表達較高。我們在乳腺癌細胞系內敲低DOT1L之後上皮細胞marker表達升高，間質細胞marker表達下降；transwell實驗證實敲低DOT1L確實抑制乳腺癌細胞的EMT。我們篩選了穩定表達DOT1L shRNA的MDA-MB-231細胞，注射入小鼠的鼠尾靜脈，檢測乳腺癌細胞的肺轉移，發現敲低DOT1L之後，肺部轉移明顯減少。分子機制方面，我們利用RNA-seq找到DOT1L的靶基因ZEB2，解釋了DOT1L促進乳腺癌轉移的原因。另一方面，我們研究發現DOT1L對血管生成具有促進作用。我們證實在人臍靜脈內皮細胞（HUVECs）中敲低DOT1L的表達會導致細胞存活降低，細胞遷移、形成管狀結構、以及形成血管樣新梢的能力降低；移植到小鼠體內的HUVECs在matrigel中形成有功能的血管網路的能力也降低。我們通過分析HUVECs中H3K79me2的ChIP-seq數據找到了DOT1L在基因組內的靶基因，其中包括對於血管生成至關重要的VEGFR2。我們的結果顯示DOT1L與ETS-1協同發揮作用激活VEGFR2的表達，活化其下游的ERK1/2和AKT信號通路，促進血管生成。我們的研究將為認識腫瘤轉移的分子機制提供理論基礎，為尋找遏制腫瘤轉移的藥物提供可能的靶點。
